[发明专利]一种胚胎培养用轻质矿物油的制备方法

说明书

本发明公开了一种胚胎培养用轻质矿物油的制备方法，以轻质矿物油（密度0.84‑0.86）为原料，主要纯化剂为乙二胺四乙酸，溶剂为灭菌注射用水，经乙醇溶液、氯化钠溶液、乙二胺四乙酸溶液纯化后得到胚胎培养用轻质矿物油，本制备方法简便快速，可有效降低矿物油内重金属、内毒素、核酸的含量，用本方法获得的轻质矿物油进行胚胎培养，可获得较高的囊胚形成率，适用于大专院校、科研院所、生殖中心的胚胎培养操作。

技术领域

本发明涉及胚胎培养技术领域，具体涉及一种胚胎培养用轻质矿物油的制备方法。

背景技术

轻质矿物油覆盖液滴培养系统已广泛用于哺乳动物早期胚胎的体外培养，其主要目的是防止培养液蒸发，维持培养液的pH值、渗透压及湿度的稳定。

轻质矿物油属于石油提炼加工产物，存在重金属离子、过氧化物等毒性，不同实验室采用很多方法进行验证，证明不同品牌、不同来源的轻质矿物油未提纯时均具有胚胎毒性，必须经过提纯加工后才可用于胚胎培养。

目前胚胎培养用轻质矿物油的制备方法有多种，例如标准培养液平衡处理法、三蒸水洗法、水洗与离心法等等，上述这些方法装置复杂又费时，且未涉及重金属离子的萃取，造成因轻质矿物油本身品质不同导致的胚胎培养用轻质矿物油质量参差不齐。因此，需要找到一种快速、简便并且高效的胚胎培养用轻质矿物油的制备方法。

发明内容

针对现有技术不足之处，本发明在于提供一种胚胎培养用轻质矿物油的制备方法，本方法获得的轻质矿物油使用安全，品质优良，进行胚胎培养可获得较高的囊胚形成率。

为了达到上述目的，本发明提供了一种胚胎培养用轻质矿物油的制备方法，主要成分包括：轻质矿物油、灭菌注射用水、无水乙醇、氯化钠、乙二胺四乙酸。

生产胚胎培养用轻质矿物油的技术方案如下。

1．乙醇溶液的配制

用量筒分别将无水乙醇和灭菌注射用水按体积比=1：（1-4）量取，在玻璃试剂瓶内充分混合。

2．氯化钠溶液的配制

准确称取0.6-1.8g氯化钠置于玻璃试剂瓶内，用量筒量取100ml灭菌注射用水倒入玻璃试剂瓶内，充分溶解。

3．乙二胺四乙酸溶液的配置

准确称取0.001-0.01g乙二胺四乙酸置于玻璃试剂瓶内，用量筒量取100ml灭菌注射用水倒入玻璃试剂瓶内，充分溶解。

4．胚胎培养用轻质矿物油的制备。

具体操作过程包括以下步骤。

（A）将轻质矿物油和乙醇溶液按体积比=1：（1-5）震荡混匀后，静置等待油水分层，取上层轻质矿物油。

（B）将步骤（A）获得的轻质矿物油和氯化钠溶液按体积比=1：（1-3）震荡混匀后，静置等待油水分层，取上层轻质矿物油。

（C）将步骤（B）获得的轻质矿物油和乙二胺四乙酸溶液按体积比=1：（1-8）震荡混匀后，静置等待油水分层，取上层轻质矿物油。

（D）将步骤（C）获得的轻质矿物油进行干热灭菌，冷却后分装，获得胚胎培养用轻质矿物油，冷藏保存。

优选的，为了保证干热灭菌效果，步骤D中的干热灭菌是通过150-160℃加热60-120min实现。

本发明的有益效果如下。

1．本发明提供了一种简便高效的胚胎培养用轻质矿物油的制备方法，经过本纯化方法获得的轻质矿物油囊胚形成率高，重金属含量、内毒素含量、过氧化物含量明显降低。