[发明专利]一种N-糖分析试剂荧光底物的合成方法

说明书

本发明公开了一种N‑糖分析试剂荧光底物的合成方法，属于体外诊断领域。以对硝基苯胺和巴豆醛为原料，通过关环反应、氧化反应制得6‑硝基喹啉‑2‑羧酸；再和N,N‑二乙基乙二胺发生缩合反应、还原反应，或6‑硝基喹啉‑2‑羧酸发生酯化反应、还原反应、与N,N‑二乙基乙二胺发生缩合反应制备得到6‑氨基‑N‑(2‑(二乙氨基)乙基)喹啉‑2‑甲酰胺；最后和N,N'‑二琥珀酰亚胺基碳酸酯发生缩合反应，制得2,5‑二氧吡咯烷‑1‑基(2‑((2‑(二乙氨基)乙基)氨甲酰)喹啉‑6‑基)氨基甲酸酯。本发明工艺的总收率高，工艺路线成本降低，后处理难度低，且终产物纯度高，具有很好的工业化生产的前景。

技术领域

本发明涉及体外诊断领域，尤其涉及一种N-糖分析试剂荧光底物的合成方法。

背景技术

采用氨基酸专属性修饰来研究蛋白质结构的发展史至少已有40年了，一般通过氨基酸分析、生物活性测定、荧光或吸光度测量等方法来确定。近年来由于质谱快速、灵敏、准确地绘制蛋白质修饰位点的能力，使得氨基酸特殊标记方法成为获得蛋白质结构信息更具优势的方法。

目前，N-糖分析试剂底物分子的市场需求量较大，但是合成的起始原料昂贵。该产品的合成方法是由6-氨基喹啉-2-羧酸为起始原料合成具有增强的MS信号的聚糖和其他生物分子的快速荧光标记物2,5-二氧吡咯烷-1-基(2-((2-(二乙氨基)乙基)氨甲酰)喹啉-6-基)氨基甲酸酯。但该合成方法的起始原料昂贵，对于生产方面有较大的压力。因此，亟需寻找一种成本低且更高效的制备N-糖分析试剂荧光底物的方法。

发明内容

[技术问题]

由6-氨基喹啉-2-羧酸为起始原料合成N-糖分析试剂荧光底物的合成方法的起始原料昂贵，对于生产方面有较大的压力。

[技术方案]

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种新的N-糖分析试剂荧光底物的合成方法。该方法反应路线设计合理，通过五步反应制得最终产品；起始原料价格便宜；反应重现性好，可实现工业化生产。

本发明提供的反应路线如下：一种N-糖分析试剂荧光底物的合成方法，反应路线为：

在本发明的一种实施方式中，所述合成方法包括以下步骤及其中间体：

(1)以对硝基苯胺和巴豆醛为起始原料，通过关环反应，制得2-甲基-6-硝基喹啉；

(2)2-甲基-6-硝基喹啉发生氧化反应，制得6-硝基喹啉-2-羧酸；

(3)6-硝基喹啉-2-羧酸和N,N-二乙基乙二胺发生缩合反应，制得N-(2-(二乙氨基)乙基)-6-硝基喹啉-2-甲酰胺；

(4)N-(2-(二乙氨基)乙基)-6-硝基喹啉-2-甲酰胺发生还原反应，制得6-氨基-N-(2-(二乙氨基)乙基)喹啉-2-甲酰胺；

(5)6-氨基-N-(2-(二乙氨基)乙基)喹啉-2-甲酰胺和N,N'-二琥珀酰亚胺基碳酸酯发生缩合反应，制得2,5-二氧吡咯烷-1-基(2-((2-(二乙氨基)乙基)氨甲酰)喹啉-6-基)氨基甲酸酯。

在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中的关环反应以路易斯酸为催化剂，所述路易斯酸选自氯化铁、氯化锌、氯化锂中的一种或几种，优选氯化锌、氯化锂；催化剂用量0.05-0.5当量，优选0.1-0.3当量；反应温度为20-80℃，优选25-50℃。

在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中的氧化反应以二氧化硒、双氧水、高锰酸钾的任一种为氧化剂，优选二氧化硒；氧化剂用量1-5当量，优选1-3当量；反应温度60-120℃，优选80-100℃。

在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中的缩合反应包括缩合剂和缚酸剂。