[发明专利]一种治疗2型糖尿病药物筛选试剂盒及其使用方法

说明书

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种治疗2型糖尿病药物筛选试剂盒及其使用方法。本发明提供的治疗2型糖尿病药物筛选试剂盒包括秀丽隐杆线虫、线虫液体培养基、大肠杆菌OP50，该试剂盒能够用于高通量筛选治疗2型糖尿病药物。本发明操作简便，检测快速，适合在筛选治疗2型糖尿病药物的领域大规模推广。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种基于秀丽隐杆线虫模型的治疗2型糖尿病药物筛选试剂盒及其使用方法。

背景技术

近年来，由于生活水平的提高、饮食结构发生改变、生活节奏加快、久坐的生活方式等因素，导致全球糖尿病发病率增长迅速，并且患者年龄呈年轻化趋势，糖尿病已经成为继肿瘤、心血管病变之后第三大严重威胁人类健康的慢性疾病，预计到2030年，糖尿病患者的人数预计将达到4.38亿。其中2型糖尿病是最常见的糖尿病类型，在糖尿病患者中，2型糖尿病占95％以上。2型糖尿病患者发生结直肠癌、肝癌、乳腺癌等恶性肿瘤的风险显著高于一般人群。

秀丽隐杆线虫是一种常见的、自由生活的小型土壤线虫。秀丽隐杆线虫有以下几个特点：身体透明，结构简单，显微镜下易于观察；生命周期短，分为4个阶段：胚胎发育期、生长发育期、生殖期和生殖后期，能够作为相对完整的实验动物模型，又可避免大鼠、小鼠模型的高价、耗时的缺点，可大幅降低药物筛选的成本，是用于大规模药物筛选的理想系统，近年来越来越多地受到科学家们的青睐。

2型糖尿病的秀丽隐杆线虫模型在daf-2基因上携带有一个突变，而秀丽隐杆线虫中daf-2基因是人类胰岛素样生长因子受体的同源物。突变体秀丽隐杆线虫中由于daf-2基因的失活而引起了类似胰岛素抵治疗的代谢变化使线虫进入了dauer期状态，因此可以通过统计、比较空白对照组和待测药物组成虫数目占线虫总数(dauer期线虫数+成虫数)的百分比来判断待测药物是否具有治疗2型糖尿病活性。

由此本发明提供一种治疗2型糖尿病药物筛选试剂盒，使用该试剂盒能够高通量筛选治疗2型糖尿病药物，本发明同时提供上述试剂盒的使用方法，供本领域研发人员高通量准确地筛选治疗2型糖尿病药物。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗2型糖尿病药物筛选试剂盒，使用该试剂盒能够筛选出治疗2型糖尿病药物。

本发明的另一个目的是提供上述治疗2型糖尿病药物筛选试剂盒的使用方法。

本发明提供一种2型糖尿病药物筛选试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下材料：

(1)秀丽隐杆线虫DR1564；

(2)5mg/ml的大肠杆菌OP50菌液；

(3)线虫液体培养基。

所述的线虫液体培养基为S液培养基。

所述的S液培养基的配置方法为：量取S基础液50mL，1M MgSO₄溶液、1M CaCl₂溶液各150μL，1M的柠檬酸缓冲液及Trace液各500μL，5mg/mL胆固醇溶液50μL，将其混合均匀，现配现用。

所述的S基础液配置方法为：称量NaCl 1.76g，KH₂PO₄ 1.80g，K₂HPO₄ 0.30g，将上述混合物溶于300mL蒸馏水，121℃灭菌20min；

所述Trace液的配置方法为：将0.093g EDTA,0.0345g FeSO₄·7H₂O,0.0145gZnSO₄·7H₂O,0.00125g CuSO₄·5H₂O,0.01g MnCl₂·4H₂O溶解于50mL蒸馏水中，121℃灭菌20min；