[发明专利]M2型巨噬细胞外泌体在治疗骨质疏松症药物制备中的应用

说明书

本发明提供一种M2型巨噬细胞外泌体在治疗骨质疏松症药物制备中的应用。通过制备M2巨噬细胞来源的外泌体，在细胞水平通过RT‑qPCR，western blotting，免疫荧光等实验证明M2‑EVs对破骨细胞的抑制作用；同时通过体内实验明确M2‑EVs对卵巢摘除小鼠的促骨质生成的作用。本发明能够抑制破骨细胞形成及其骨吸收能力，并在体内抑制OVX小鼠的骨丧失能力；可用于骨质疏松等相关疾病的治疗。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及巨噬细胞来源的外泌体的新应用，其中具体涉及一种M2巨噬细胞来源的外泌体在骨质疏松中的应用。

背景技术

骨质疏松症(OP)是一种系统性骨骼疾病，其特征是骨量低和骨组织微结构破坏，从而导致骨脆性增加和骨折易感性。随着人口老龄化的增长，骨质疏松症已成为最常见的骨骼疾病之一。成骨细胞和破骨细胞的功能失调是骨质疏松症的主要原因。研究表明，巨噬细胞极化改变可以减少骨吸收因子，促进骨生成以及骨矿化。

巨噬细胞是一种具有高度异质性和可塑性的细胞，可根据不同刺激和微环境，在体内分化为不同类型。其中未被激活巨噬细胞(M0)，可通过脂多糖(LPS)和/或干扰素-γ(IFN-γ)激活为促炎性巨噬细胞表型(M1)，产生高水平的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、IL-1β和IL-6，启动免疫反应，清除病原体和肿瘤细胞。或者被白细胞介素-4(IL-4)、IL-13或IL-10激活分化形成抗炎型巨噬细胞，(M2)表型，可表达高水平的精氨酸酶1(Arg1)、IL-4、IL-10、IL-1ra、巨噬细胞甘露醇受体(CD206)、转化生长因子β(TGF-β)和血管内皮生长因子(VEGF)等，在组织修复和新生血管形成中起核心作用。但由于异体细胞的免疫原性等原因，其应用备受限制。

而细胞外泌体作为一种新型的细胞通讯介质，因其独特的优势而受到越来越多的关注。外泌体是直径为30～150nm的小囊泡和脂质双层。通过细胞胞吐释放后，细胞外囊泡与靶细胞的表面受体相互作用，并通过内吞作用将细胞内成分(包括蛋白质、脂质、mRNAs和miRNA)运输到靶细胞的胞质溶胶。细胞外囊泡还可以介导分泌细胞和细胞外基质之间的级联信号，并作为细胞外基质中邻近细胞的间接通讯。此外，细胞外囊泡可以释放到血液或淋巴管中，与靶细胞进行远距离通信。它们通过复杂的基因调控网络参与许多生物过程，但不受受体与配体结合的限制。细胞外囊泡被认为是传递miRNA的主要途径，同时也参与蛋白质的转运。由于其依赖于多样化的监管模式、高吸收效率、易用性和灵活性，最近受到越来越多的关注。

发明内容

本发明的目的是要提供一种巨M2型巨噬细胞外泌体在治疗骨质疏松症药物制备中的应用。

本发明采用的技术方案具体如下：

一种M2型巨噬细胞外泌体在治疗骨质疏松症药物制备中的应用。

进一步地，所述M2巨噬细胞外泌体为可以靶向破骨细胞前体的，由M2巨噬细胞所分泌的一种囊泡。

进一步地，所述骨质疏松症为原发性骨质疏松症或继发性骨质疏松症。

进一步地，所述药物为注射剂、片剂、胶囊剂、粉末剂等。其中，注射剂将提取的新鲜外泌体以磷酸缓冲盐溶液为溶剂制备。

进一步地，可将外泌体冻干之后制备成片剂、胶囊剂、粉末剂。

本发明的有益效果是，本发明通过制备M2巨噬细胞来源的外泌体，在细胞水平通过RT-qPCR、WB、免疫荧光、TRAP染色明确M2-EVs能够有效抑制破骨细胞形成及骨吸收能力，在动物体内可证实M2-EVs可有效抑制OVX小鼠的骨质流失情况。

附图说明

图1为M2巨噬细胞的诱导结果图，其中，A为光学显微镜图(放大倍数20)，B为精氨酸(Arginase-1)和甘露醇受体(Mannose receptor)RT-qPCR检测结果图；