[发明专利]一种高灵敏度特异性透散射一体法肌钙蛋白I胶乳比浊检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种高灵敏度特异性透散射一体法肌钙蛋白I胶乳比浊检测试剂盒，属于生物检测技术领域。本发明公开的一种高灵敏度特异性透散射一体法肌钙蛋白I胶乳比浊检测试剂盒，包括第一试剂R1和第二试剂R2；R1包括HEPES‑NaOH缓冲液、NaCl、聚乙二醇12000、吐温‑20、兔多克隆抗体阻断剂、氧化剂；R2包括缓冲液、吐温‑20、480nm羧基胶乳、380nm羧基胶乳、保护剂、肌钙蛋白I兔多克隆抗体、SignalUp^TMWestern检测增敏剂、重组人血白蛋白。本发明试剂盒表面健康人群检出率≥95％、透射与散射结果偏差小于10％，克服了现有透射比浊缺陷，显著提高了试剂检出率。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，更具体的说是涉及一种高灵敏度特异性透散射一体法肌钙蛋白I胶乳比浊检测试剂盒。

背景技术

心肌肌钙蛋白是心肌受到损伤后可在血液中检测到的标志物，对诊断急性冠状动脉综合症(ACS)和心脏疾病的风险分层有重要价值，是诊断急性心肌梗死(AMI)的首选指标。新一代高敏肌钙蛋白I(hs-cTnI)灵敏度更高，有助于更早期判断AMI、更易于筛查心血管疾病高危人群，更易于准备评估预后情况。

由中华医学会心血管病学分会和中华医学会检验医学分会共同组织制定的《高敏感方法检测心肌肌钙蛋白临床应用中国专家共识》中提到hs-cTn应满足以下两点要求：1：能够在50％以上表面健康人群检测到cTn；2：参考范围上限第99个百分位值的检测不精密度(以CV表示)≤10％。可以明确的是，cTnI在正常人血清中含量极低，hs-cTnI是能够检测到人体内更低浓度的cTnI，需提高检测分析灵敏度，因此对试剂灵敏度、特异性、准确度提出了更高的要求。

目前，心肌肌钙蛋白的检测方法主要有酶联免疫吸附法、胶体金法、化学发光法、胶乳比浊法，而目前市面上受认可的高敏肌钙蛋白I，主要基于大型化学发光平台进行研发，如贝克曼hs-TnI、雅培hs-TnI，其他产品或其他方法学多是具有分析灵敏度无法达到的缺陷。对于单个测试来说，化学发光法通常需要1小时左右才能报告结果，因此，临床需要一种高灵敏度、高特异性、操作简便、低成本的检测方法。

透散射一体法检测，是2020年新出现的，在原有胶乳免疫比浊法基础上升级而来的新方法学，该方法学实现需要硬件基础和试剂基础两部分。

硬件设备，由日本Hitachi高新公司于2013年前开发的透散射一体仪器(如日立3500等)，2015年面市，2019年2月获得NMPA医疗器械注册证。硬件方面，透散射一体机在传统生化分析仪透射检测的基础上，增加了散射光检测模块，同一个检测，在0.7s内完成透射光和散射光检测，分别计算信号值，然后通过软件融合二者的结果。IVD领域的常识是散射检测灵敏度高，但是检测范围很窄，无法区分高值；透射检测灵敏度低，低值检测重复性差，但是透射检测范围广，能有效区分高值；透散射一体法通过结果融合，低浓度区域使用散射结果，高浓度区域使用透射结果，继承了透射和散射免疫比浊的优点，规避了缺点，可以得到高灵敏度，高线性范围的检测。透散射一体法仅通过透散射一体机硬件能力和软件算法，平均能够提高4倍灵敏度。

配套透散射一体机的透散射一体法胶乳比浊试剂，2020年下半年才逐渐出现。胶乳比浊试剂能够使用透散射一体法的前提：1、对于同一样本，在透散射重合区(融合区)，透射和散射检测结果一致，即偏差小于10％，部分厂家不能满足，无法达到临床需求；2、由于微球，试剂配方等多方面问题，并不是所有的胶乳比浊试剂，在日立透散射一体机上均能获得灵敏度提升，配方不适合的试剂，甚至会出现灵敏度下降导致测定重复性(精密度)降低；3、散射检测HOOK效应比透射更加严重，原本在透射上不能解决HOOK效应问题的试剂，使用透散射一体法，将导致更多被低估和假阴性结果。