[发明专利]一种高特异性透散射一体法降钙素原胶乳比浊检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种高特异性透散射一体法降钙素原胶乳比浊检测试剂盒，属于生物检测技术领域。本发明公开的一种高特异性透散射一体法降钙素原胶乳比浊检测试剂盒，包括第一试剂R1和第二试剂R2；R1包括Hepes‑NaOH缓冲液、NaCl、聚乙二醇12000、吐温‑20、Titer经典水溶性佐剂、多克隆抗体阻断剂；R2包括缓冲液、吐温‑20、480nm羧基胶乳、350nm羧基胶乳、300nm羧基胶乳、保护剂、PCT多克隆抗体。本发明可实现PCT检测范围0.05‑20ng/ml的线性范围；0.1ng/ml重复性CV10％；临床样本与罗氏相关性系数0.95。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，更具体的说是涉及一种高特异性透散射一体法降钙素原胶乳比浊检测试剂盒。

背景技术

降钙素原(PCT)检测是判断感染严重程度以及区分病毒和细菌感染，规范抗生素使用的重要指标，参见《降钙素原在成人下呼吸道感染性疾病分级管理中的应用专家共识》：0.1ng/ml时，排除细菌感染可能，不推荐使用抗生素；0.25-0.5ng/ml时，可能存在细菌感染，可以使用抗生素；≥0.5ng/ml时，存在细菌感染，强烈需要使用抗生素；参见BRAHMSPCT标准，脓毒症与PCT关系：0.5-2.0ng/ml，可能存在脓毒症及休克风险；PCT2ng/mL预示高风险的严重脓毒血症和/或感染性休克。可以清楚的看到，作为临床诊断使用的PCT检测试剂盒，至少要能精准的区分0.1ng/ml这个截断点，同时，0-2ng/ml这一段最具辅助诊断意义的临床结果要非常可靠。

目前降钙素原PCT检测现在常用化学发光法，荧光或胶体金层析法，微流控法，胶乳比浊法进行测定；其中，仅有罗氏公司的电化学发光法降钙素原检测能够满足临床需求，其他方法以及化学发光法的其他厂家，目前或多或少存在灵敏度不足的，无法准确区分0.1-0.25ng/ml这一段灰区样本的情况；同时，由于试剂配方和工艺问题，市场上多数厂家0-2ng/ml这一段最具辅助诊断意义的临床样本结果会存在假阴性和假阳性问题。

透散射一体法检测，是2020年新出现的，在原有胶乳免疫比浊法基础上升级而来的新方法学，该方法学实现需要硬件基础和试剂基础两部分。

硬件设备，由日本Hitachi高新公司于2013年前开发的透散射一体仪器(如日立3500等)，2015年面市，2019年2月获得NMPA医疗器械注册证。硬件方面，透散射一体机在传统生化分析仪透射检测的基础上，增加了散射光检测模块，同一个检测，在0.7s内完成透射光和散射光检测，分别计算信号值，然后通过软件融合二者的结果。IVD领域的常识是散射检测灵敏度高，但是检测范围很窄，无法区分高值；透射检测灵敏度低，低值检测重复性差，但是透射检测范围广，能有效区分高值；透散射一体法通过结果融合，低浓度区域使用散射结果，高浓度区域使用透射结果，继承了透射和散射免疫比浊的优点，规避了缺点，可以得到高灵敏度，高线性范围的检测。透散射一体法仅通过透散射一体机硬件能力和软件算法，平均能够提升4倍灵敏度。

配套透散射一体机的透散射一体法胶乳比浊试剂，2020年下半年才逐渐出现。胶乳比浊试剂能够使用透散射一体法的前提：1、对于同一样本，在透散射重合区(融合区)，透射和散射检测结果一致，即偏差小于10％；2、由于微球，试剂配方等多方面问题，并不是所有的胶乳比浊试剂，在日立透散射一体机上均能获得灵敏度提升，配方不适合的试剂，甚至会出现灵敏度下降导致测定重复性(精密度)降低；3、散射检测HOOK效应比透射更加严重，原本在透射上不能解决HOOK效应问题的试剂，使用透散射一体法，将导致更多被低估和假阴性结果。