[发明专利]高表达miR-214的外泌体及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及细胞生物学技术领域，尤其涉及高表达miR‑214的外泌体及其制备方法与应用。本发明利用大鼠心梗模型评价miR‑214表达不同的外泌体的心肌修复效果。与对照组相比，miR‑214高表达的外泌体治疗组的梗死面积较小，新生血管数目增加，明显改善心梗的预后。所以在外泌体中高表达miR‑214可以促进心功能恢复及血管新生。

技术领域

本发明涉及细胞生物学技术领域，尤其涉及高表达miR-214的外泌体及其制备方法与应用。

背景技术

进入21世纪以来，随着人们生活方式的改变、生活节奏的加快以及工作压力的加大，我国心血管疾病尤其是缺血性心脏病的发病率逐年上升并呈年轻化趋势，并带来了沉重的社会、经济负担。

缺血性心脏病，尤其是急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)发生后由于缺血缺氧的微环境，导致梗死区大量的心肌细胞死亡，并逐步导致心室重构，是当今心源性死亡的主要原因。随着医学技术的发展，传统的介入治疗、溶栓药物治疗等方面已经取得了重大的进展，极大的提高了病人的生存率。但是目前常规的治疗手段仅能改善心肌缺血状况，并不能有效改善远期预后，病人最终仍有较大几率最终发展成为心力衰竭。

心肌梗死后，心肌逐步发生重构，且分为两个主要阶段:炎症阶段，募集炎症细胞在损伤部位的聚集清除组织碎片，然后进入修复阶段主要包括诱导血管生成、成纤维细胞激活，发生纤维化和瘢痕形成。在心梗后的左室重构过程中，血管新生对于避免心力衰竭具有重要作用。研究发现，新生血管在促进心肌修复的过程中发挥了重要作用，可以通过促进新的毛细血管和侧支动脉血管的形成来改善微循环，从而在心梗后的早期挽救心肌，有效防止长期左心室重构和心力衰竭。

干细胞移植治疗缺血性心脏病是近20年来发展起来的一种临床治疗缺血性心脏病的新策略，目前已有很多研究证实诱导多能干细胞(iPSCs)、胚胎干细胞(ESCs)以及间充质干细胞(MSCs)等多种干细胞均可以改善心梗预后。尤其是间充质干细胞，因其来源广泛、易于获取以及可标准化制备等诸多优点受到了特别的关注。临床试验以及不同的动物模型已经证实，间充质干细胞移植治疗缺血性心脏病，能够修复受损心肌，减少梗死面积，改善心脏功能。间充质干细胞修复受损心肌主要是依赖于其旁分泌功能。外泌体作为一种重要的旁分泌效应因子在干细胞修复受损心肌的过程中发挥了重要作用。外泌体是细胞分泌的一种直径在30-150nm之间的双层脂质囊泡，可携带多种细胞因子、ncRNA等，进入受体细胞并调控受体细胞的功能，介导细胞间通讯。MSCs来源的外泌体可以诱导血管新生。诸多研究表明，外泌体中富含血管新生的活性物质，包括mRNA、miRNA以及促血管新生的蛋白分子等，并通过激活不同的信号通路发挥心肌修复的作用。Zhang等发现hiPSC-MSC来源的外泌体可以促进内皮细胞的增殖、迁移以及成管能力并促进损伤部位的血管形成，促进损伤修复。

MiRNA是一种长度20-22nt的非编码RNA，可在转录后调控基因的表达，进而调控的细胞增殖、凋亡等生物学行为。miRNA在诱导血管新生的过程中具有重要作用，Sahoo等研究发现人CD34⁺干细胞来源的外泌体中miR-126和miR-130a可以促进缺血组织的血管新生。人脂肪干细胞中的miR-125a和miR-31可以通过外泌体转运到血管内皮细胞中并促进新生血管。已有研究显示miR-214可抑制Sufu的表达，激活Sonic Hedgehog通路，促进血管新生，但其在心梗后调控血管新生，治疗心梗方面的研究尚未见报道。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供miR-214在治疗心梗中的应用；并且进一步提供高表达miR-214的外泌体及其制备方法以及在制备治疗心梗药物中的应用。

本发明提供了miR-214在制备治疗心梗的药物中的应用。

在本发明中所述治疗包括促进血管形成、促进心肌功能的恢复、改善心功能、降低纤维化面积或梗死面积。