[发明专利]一种新型海胆生殖腺多糖的纯化方法、分子结构及其用途

权利要求书

1.一种新型海胆生殖腺多糖，其特征在于，该多糖来源于马粪海胆Hemicentrotuspulcherrimus，所述海胆生殖腺多糖的分子结构为：

上述结构中，主链由α-葡萄糖组成，侧链为α-葡萄糖和α-葡萄糖醛酸。

2.一种如权利要求1所述的海胆生殖腺多糖，其特征在于，其平均分子量为2.996×10⁷Da，重复单元由(1,4)-α-葡萄糖、(1,4,6)-α-葡萄糖、末端-α-葡萄糖、末端-α-葡萄糖醛酸这4种糖残基组成，比例为12：3：2：1。

3.一种如权利要求1所述的海胆生殖腺多糖的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取新鲜采集的马粪海胆，解剖取出海胆黄，将海胆黄匀浆后用乙醇脱脂、干燥得到脱脂粉末；脱脂粉末经水提、水提液浓缩、木瓜蛋白酶和Sevag法脱除蛋白、透析、醇沉、干燥后得到海胆总多糖粉末；

(2)海胆总多糖经水溶后用DEAE-52离子交换柱色谱纯化；

(3)步骤(2)得到的多糖水溶液减压浓缩后，用分子排阻色谱纯化得到本发明的多糖；

步骤(1)中，使用水提取法，提取温度小于50℃，水的用量是脱脂粉末的8-20倍；木瓜蛋白酶的量按脱脂粉末：蛋白酶＝100:(4-8)的质量比计算加入；

步骤(2)中，DEAE-52离子交换柱色谱纯化中，总多糖配制成20-50mg/mL水溶液，上样体积为1/20-1/10柱体积，加入色谱柱后，用3-5个柱体积的蒸馏水洗脱，每1/20柱体积接收一份，苯酚-硫酸法检测目标多糖所在部位，收集合并；

步骤(3)中，分子排阻色谱法的固定相是Sepharose CL-2B琼脂糖凝胶，上样多糖浓度为20-50mg/mL，用3-4个柱体积的蒸馏水洗脱，洗脱时每1/20柱体积接收一份，苯酚-硫酸法检测目标多糖所在部位，合并后经减压浓缩、冷冻干燥得到本发明的海胆多糖，其纯度高于99.5％，不含核酸和蛋白质。

4.如权利要求1～3任一项所述的多糖在制备肿瘤细胞毒制剂中的应用。

5.如权利要求1～3任一项所述的多糖在制备抗肿瘤药物中的应用。