[发明专利]一种促进中轻度损伤皮肤快速修复愈合的凝胶的制备方法

权利要求书

1.一种促进中轻度损伤皮肤快速修复愈合的凝胶的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1、制备脐带血白细胞因子；

S2、利用步骤S1制得的脐带血白细胞因子进行脐带间充质细胞的培养；

S3、收集步骤S2中培养液的上清液；

S4、使用步骤S3收集的上清液制备凝胶。

2.根据权利要求1所述的一种促进中轻度损伤皮肤快速修复愈合的凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤S1包括以下步骤：

S11、采集脐带血，并将脐带血保存在含有ACD-A抗凝剂的一次性血袋中运送到实验室；

S12、将脐血转入到50ml离心管中，550g离心20分钟，将上层血浆和白膜层转移到50ml离心管中；

S13、将原离心管再经过1000g二次离心10分钟，再次收集血浆和白膜层；

S14、将第二次收集的血浆和白膜层合并到第一次收集的离心管中，-75℃～-85℃冷冻保存；

S15、进行传染病和内毒素检测；

S16、符合要求的上清混合物置于35℃～38℃水浴锅中融化，分别经过0.45μm和0.1μm的微孔滤膜过滤，获得脐带血白细胞因子混合物提取液；

S17、脐带血白细胞因子混合物提取液置于-75℃～-85℃冷冻保存备用。

3.根据权利要求2所述的一种促进中轻度损伤皮肤快速修复愈合的凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤S15中，传染病检测类型包括但不限于乙肝、甲肝、丙肝、戊肝、梅毒、艾滋病、巨细胞病毒、细小病毒。

4.根据权利要求1所述的一种促进中轻度损伤皮肤快速修复愈合的凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤S2包括以下步骤：

S21、经37℃解冻后的脐带间充质干细胞转移至加入8ml培养液的15ml离心管中，轻轻混匀，1500g离心5分钟；

S22、弃上清液，2ml重悬细胞，进行细胞计数；

S23、在T175培养瓶中加入20ml上述培养液，按1x104个细胞/cm²接种至培养瓶中，轻轻摇晃混匀，放入37℃、5％CO₂培养箱中培养。

5.根据权利要求4所述的一种促进中轻度损伤皮肤快速修复愈合的凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤S21中培养液的成分具体为10％脐带血白细胞因子混合物提取液、1％青/链霉素双抗，其余的为CTSDMEM/F12。

6.根据权利要求1所述的一种促进中轻度损伤皮肤快速修复愈合的凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤S3包括以下步骤：

S31、待步骤S2中培养的细胞生长至70％-80％汇合度时，每48小时收取上清培养液，并换液；

S32、收集的上清培养液置于50ml离心管3000g离心5分钟，取上清；

S33、上清液经过0.2um过滤后于-20℃保存备用。

7.根据权利要求1所述的一种促进中轻度损伤皮肤快速修复愈合的凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤S4包括以下步骤：

S41、在无菌的500ml离心管中，加入步骤S3收集的上清液，再加入0.5-2.5％的医用级无菌的卡波姆980、1-10％的甘油和1-10％脐带血白细胞因子提取液，混匀；

S42、用经过0.2μm过滤除菌的10％的NaOH调节凝胶pH值为6.8-7.2，混匀；

S43、3000g离心10分钟，分装在20ml不透光亚克力真空瓶中，4℃保存。