[发明专利]一种猪胆盐的生产方法

说明书

本发明公开了一种猪胆盐的生产方法，包括专用水解酶制备、酶水解、脱油、脱色、浓缩干燥粉碎等工艺步骤，其中酶水解包含菌株选取、制备发酵培养基、发酵、水解酶的提取、水解酶的检测等步骤；本工艺方法解决现有工艺中反应条件剧烈、耗时长，能耗高，油脂不易去除、工艺复杂等弊端，通过选用已用菌株自行发酵生产水解酶，能将猪胆提取胆红素以后的下料粗胆酸水解彻底完全，并进一步生产猪胆盐。本工艺生产猪胆盐，生产工艺简单、耗时短、条件温和、能耗低，对环境友好，容易实现。本工艺生产的猪胆盐在BGLB培养基和肠道菌筛选培养基上，微生物效果特征明显，比现有技术生产的猪胆盐制作培养基的微生物效果明显。

技术领域

本发明涉及胆盐生产技术领域，具体涉及一种猪胆盐的生产方法。

背景技术

猪胆盐是猪的肝细胞分泌的胆汁酸类形成的钠盐，其主要用途为，添加在培养基中，作为革兰氏阳性菌的抑菌剂使用，同时能促进肠道菌群生长。

利用已提取胆红素钙盐后的粗胆酸生产猪胆盐，现有的，普遍的生产工艺为纯化学法。其化学工艺为：取已提取胆红素钙盐的粗胆酸适量研碎，加9倍量的水及1.5倍量工业氢氧化钠，煮沸皂化8小时以上，使粗胆酸中的胆汁酸、脂肪、蛋白及磷脂等水解完全，冷却后，过滤，弃去少量不溶物残渣。再脱色、酸化、形成钠盐、浓缩干燥，研碎，得呈淡黄色粉末的猪胆盐产品。纯化学工艺关键在于水解程度是否彻底，水解工艺具有反应条件剧烈、耗时长，能耗高的特点，后续生产工艺中有油脂不易去除、色深色泽差、工艺复杂等特点。

发明内容

为解决上述背景技术中提到的问题，本发明提供一种猪胆盐的生产工艺方法。通过自制水解酶，运用此种酶水解粗胆酸生产猪胆盐，能解决现有工艺中反应条件剧烈、耗时长，能耗高的缺点，通过后段工艺改进，能解决油脂不易去除、色深色泽差、工艺复杂等弊端。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

(一)制备专用水解酶，具体步骤如下：

(1)菌株选取及制备菌种液：选取我公司在做胆汁下料生物转化时发现的，对猪胆汁有水解作用的细菌ATCC17666，它是杆菌，革兰氏阴性菌，已甘油管保存。转接传代制作菌种液；

(2)制备发酵培养基：取牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、氯化钠0.5％、乳糖0.5％、磷酸氢二钾0.1％、水，制成培养基；氨水调节PH＝7.0-7.5,于121℃，30分钟灭菌，冷却至60℃加入1.25％无菌卡那霉素标记溶液；

(3)发酵：待发酵罐内培养基降温至37℃，校准DO电极，pH调整至7.0-7.5，无菌接入菌种液，通过发酵罐控制系统，平稳发酵至菌浓9-11％、发酵罐中的菌体代谢缓慢，酶活不再增加时，结束发酵；

(4)水解酶的提取：将发酵液细胞破碎仪破碎，离心，后收集上清，硫酸铵盐析，搅拌，再离心收集酶泥，放冷库-20℃以下保存备用；

(5)水解酶的检测：在特定温度35-37℃，PH5.7-5.9范围，以粗胆酸为底物，1min水解粗胆酸生产1umolCDCA所需的酶量，定义为1个酶活单位(U)；通过液相示差定量测含量，计算水解酶的酶活量；

(二)酶水解：称取一定量的粗胆酸，加入10倍粗胆酸的水，用氢氧化钠水调节PH至5.7-5.9，控制温度35-37℃，加入物料0.5％的水解酶水解1小时，液相检测水解达95％以上停止水解；

(三)调节PH值、脱油：将上述步骤(二)中的水解液调节PH至10以上，过滤后取清液，加入粗胆酸300％的石油醚，45-50℃搅拌萃取脱油，静置后分液得水相；

(四)脱色：将上述步骤(三)中脱油后的水相液，加入粗胆酸10％的活性碳，控制温度70-75℃搅拌30分钟以上脱色；

(五)浓缩干燥粉碎：将上述步骤(四)中的脱色液过滤后取清液，浓缩至流态膏状后，放于100-130℃烘箱中，干燥至干燥失重5％以下，粉碎成末，包装即可。