[发明专利]一种钙化相关蛋白基因及其应用

说明书

本发明涉及甲壳动物生长发育领域，具体涉及一种钙化相关蛋白（CRP）基因及其在日本沼虾蜕壳过程和生长发育的应用。日本沼虾钙化相关蛋白（CRP）基因的碱基序列如SEQ ID NO:1所示。本发明首次阐明了CRP基因的生物学功能：（1）调控日本沼虾的蜕壳；（2）通过调控蜕壳过程，CRP基因也在日本沼虾的生长发育过程中发挥作用。

技术领域

本发明涉及甲壳动物生长发育领域，具体涉及一种钙化相关蛋白（CRP）基因及其在日本沼虾蜕壳过程和生长发育的应用。

背景技术

十足目甲壳动物主要为各种虾、蟹类。蜕壳，也叫蜕壳，即甲壳动物蜕去旧表皮长出新表皮的过程，是甲壳动物生长和发育的标志特征，贯穿其整个生命周期。甲壳动物每一次蜕壳往往会迎来一次跳跃式的增长，蜕壳前后体重差异极大。近几年来，我国的甲壳类水产动物养殖规模不断扩大，虾蟹类的养殖产量逐年上升，蜕壳失败一直是给甲壳类水产养殖造成严重损失的主要原因之一，因此蜕壳的调控机制一直是甲壳类水产动物研究的重点领域之一。

日本沼虾（Macrobrachium nipponense），俗称青虾、河虾，隶属于十足目、长臂虾科、沼虾属。具有适应性强、生长速度快、繁殖力强、个体大、营养丰富等特点，是我国大规模养殖的淡水经济虾类中唯一的本土品种。根据《2021年中国渔业统计年鉴》，我国养殖青虾年产量已超过为23万吨。日本沼虾养殖已经成为渔民增产创收的重要手段之一，在我国的水产养殖中发挥着重要作用。近来随着养殖规模的不断扩大，日本沼虾出现了生产性能逐渐下降的现象，其中蜕壳困难和蜕壳失败导致的死亡率日益提高，特别是夏季高温季节，给养殖户造成的严重的经济损失。日本沼虾蜕壳是一个复杂的生物学过程，其中蜕壳相关基因的表达与调控至关重要。因此，鉴定并明确日本沼虾蜕壳过程中的重要基因就成为当前亟待解决的问题。

钙化相关蛋白（calcification-related peptide，CRP）基因的功能还鲜有研究，是否参与了甲壳动物动物蜕壳过程，还未见报道。

发明内容

本发明目的在于明确一种日本沼虾钙化相关蛋白（CRP）基因及其在调控日本沼虾蜕壳、生长发育中的应用。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

一种钙化相关蛋白基因,日本沼虾钙化相关蛋白（CRP）基因的碱基序列如SEQ IDNO:1所示。

一种钙化相关蛋白基因的应用,所述SEQ ID NO:1所示日本沼虾钙化相关蛋白（calcification-related peptide，CRP）基因的双链RNA在调控日本沼虾蜕壳与生长中的应用。

所述日本沼虾CRP基因的双链RNA的碱基序列为SEQ ID NO:5所示。

一种调控日本沼虾蜕壳与生长的基因，调控日本沼虾蜕壳与生长的基因为所述SEQ ID NO:1所示基因的双链RNA，如SEQ ID NO:5中所示的碱基序列。

一种延长日本沼虾蜕壳周期的制剂，含所述的日本沼虾CRP基因的双链RNA（dsRNA-CRP）。

所述制剂中含dsRNA浓度为4-8 μg/μL。

所述日本沼虾CRP基因的双链RNA（dsRNA-CRP）为利用RNA干扰（RNAi）技术，根据SEQ ID NO:1所示的碱基序列CRP基因的开放阅读框设计干扰引物，以日本沼虾的肌肉总RNA为模板进行PCR反应，再以PCR反应液为模板进行体外合成如SEQ ID NO:5所示的双链RNA（dsRNA），将获得的双链RNA（dsRNA-CRP）溶解于DEPC水中即得到延长日本沼虾蜕壳周期的制剂。

所述根据SEQ ID NO:1所示的碱基序列CRP基因的开放阅读框设计干扰引物为正向上游引物序列如SEQ ID NO:2所示，反向下游引物序列如SEQ ID NO:3所示。