[发明专利]基于代谢组分析研究产乙酸嗜蛋白菌代谢特性的方法

权利要求书

1.基于代谢组分析研究产乙酸嗜蛋白菌代谢特性的方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1：接种产乙酸嗜蛋白菌，取菌液样本，使用甲醇提取法处理样本；

S2：对菌液样本进行分析，通过液相色谱-质谱联用技术分析得到原始数据，确定产乙酸嗜蛋白菌的代谢物成分；

S3：对质谱分析得到的原始数据进行分析，设置筛选条件，得到高质量数据；

S4：建立PLS-DA模型对高质量数据进行比较，筛选产乙酸嗜蛋白菌的差异代谢物；

S5：对差异代谢物进行相关性分析和代谢路径分析，明确产乙酸嗜蛋白菌的代谢特性。

2.根据权利要求1所述的基于代谢组分析研究产乙酸嗜蛋白菌代谢特性的方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1：制备培养液，将产乙酸嗜蛋白菌接种至培养液中，使用甲醇提取法处理菌液样本以及对照样本，并设置质控样本；

S2：将菌液样本和质控样本进样，通过液相色谱-质谱联用技术分析得到原始数据A，将对照样本进样，通过液相色谱-质谱联用技术分析得到原始数据B；

S3：对质谱分析得到的原始数据A、原始数据B进行分析，将菌液样本和对照样本中检测到的色谱峰进行积分，用总峰面积对相对定量结果标准化，得到代谢物的相对定量结果，设置筛选条件进行初筛，得高质量数据A和高质量数据B；

S4：采用PLS-DA模型对高质量数据A和高质量数据B进行比较，根据PLS-DA模型中的筛选条件，筛选出产乙酸嗜蛋白菌的差异代谢物；

S5：对差异代谢物进行相关性分析和差异代谢物的路径分析，得到产乙酸嗜蛋白菌的显著富集通路，根据显著富集通路中的差异代谢物转换路径，明确产乙酸嗜蛋白菌的代谢特性。

3.根据权利要求1所述的基于代谢组分析研究产乙酸嗜蛋白菌代谢特性的方法，其特征在于：所述S3步骤中，筛选条件设置为：mzCloud best match≥85.00，分子准确质量数的最大偏差在5ppm内，峰面积≥2×10⁶、两组间的倍数变化FC2或0.5和P-value0.05。

4.根据权利要求1所述的基于代谢组分析研究产乙酸嗜蛋白菌代谢特性的方法，其特征在于：所述代谢路径分析是通过KEGG数据库搜索产乙酸嗜蛋白菌的差异代谢物，得到差异代谢物的所有相关代谢路径，满足条件时，则该通路为KEGG富集通路，借助超几何检验方法，得到通路富集的P-value值，满足阈值条件即为产乙酸嗜蛋白菌差异代谢物中显著富集的KEGG通路，通过KEGG通路富集分析能确定差产乙酸嗜蛋白菌的代谢特性。

5.根据权利要求4所述的基于代谢组分析研究产乙酸嗜蛋白菌代谢特性的方法，其特征在于：所述KEGG富集通路满足条件为：x/ny/N，其中，N为所有代谢物中参与KEGG代谢通路的代谢物数目，n为N中差异代谢的数目，y为注释到某个KEGG通路的代谢物数目，x为富集到某个KEGG通路的差异代谢物数目。

6.根据权利要求4所述的基于代谢组分析研究产乙酸嗜蛋白菌代谢特性的方法，其特征在于：所述阈值条件为P-value≤0.05。

7.根据权利要求2所述的基于代谢组分析研究产乙酸嗜蛋白菌代谢特性的方法，其特征在于：所述PLS-DA模型筛选条件为：第一主成分的变量投影重要度1和P-value0.05。

8.根据权利要求1所述的基于代谢组分析研究产乙酸嗜蛋白菌代谢特性的方法，其特征在于：所述甲醇提取法为；用80％冷甲醇配制浓度为1mg/mL的2-氯-L-苯丙氨酸作为内标液，在菌液样本中加入4μL的1mg/mL的2-氯-L-苯丙氨酸，在菌液样本和对照样本中加入296μL的80％冷甲醇，涡旋10s，冰水浴中超声10min，重复3次，在-20℃下静置0.5h，在4℃，15000g离心力下离心10min，收集上清液。

9.根据权利要求2所述的基于代谢组分析研究产乙酸嗜蛋白菌代谢特性的方法，其特征在于：所述质控样本设定方法为：将经过甲醇提取法处理的菌液样本和对照样本1:1混合均匀，所述对照样本为不接种产乙酸嗜蛋白菌的培养液，同时用80％冷甲醇设置为空白样本。