[发明专利]一种基于肽和抗体的疾病蛋白标志物的检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种基于肽和抗体的疾病蛋白标志物的检测试剂盒及其应用，属于蛋白检测技术领域。一种基于肽和抗体的疾病蛋白标志物的检测试剂盒，包括以下组分：包被于固相载体的蛋白标志物抗体、肽的生物探针材料Pep/PtPd@ZrN@COF。根据检测原理不同，分为基于电化学生物传感器检测和ELISA检测。本发明提供的两种生物传感器都具有较低的成本、较高的灵敏度、较宽的检测范围、较低的检出限和操作较方便等特点。

技术领域

本发明属于蛋白检测技术领域，具体涉及一种基于肽和抗体的疾病蛋白标志物的检测试剂盒及其应用。

背景技术

对于很多常见重大疾病而言，早期诊断至关重要。近年来随着免疫学、分子生物学和基因组学技术的发展，寻找和发现可靠的早期诊断生物标记物已经成为目前的一个研究热点。目前在多种疾病中已经明确筛选得到多种早期诊断标志物。例如，英国谢菲尔德大学(University ofSheffield)的研究人员通过对超过19000篇与血液中癌症生物标记物有关的研究的筛选，找出了 786种血液中与癌症相关的生物标记物。这些生物标记物可能被用于开发针对大众的早期癌症筛选测试。阿尔茨海默病已成为大脑研究的焦点，血浆中包含有丰富的蛋白质、激素、RNA和炎性标志物等。有些蛋白质，比如许多参与炎性反应的蛋白质，都可以被鉴定作为阿尔兹海默氏症的潜在诊断标志物。Aβ肽类被认为是阿尔兹海默氏症检测结果，且已经得到了大量研究。胰岛素自身抗体对1型糖尿病而言是一种可靠的生物标志物。生物标志物 LRRK2在遗传性帕金森病中发挥着作用。心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP) 是早期确定和排除急性心肌梗死(AMI)的重要依据，同时心肌肌钙蛋白 (cTnI)是检测急性心肌梗死的黄金标志物。

目前，疾病的生物标记物根据检测方法的差异进行了分类，比如微小 RNA和游离DNA可以通过PCR或者测序的方式检测到，而蛋白类的生物标记物则需要电化学发光、表面等离振子共振、引导模式共振、微流控技术、免疫测试(ELISA等)或者质谱(MassSpectroscopy)的方式来检测。这些技术大多数都依赖于大型仪器，这些仪器昂贵、灵敏度低且耗时。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种基于肽和抗体的疾病蛋白标志物的检测试剂盒及其应用，具有检测灵敏度高、检测成本低的特点。

本发明提供了一种基于肽和抗体的疾病蛋白标志物的检测试剂盒，包括以下组分：

包被于固相载体的蛋白标志物抗体、肽的生物探针材料 Pep/PtPd@ZrN@COF。

优选的，基于ELISA检测原理，所述包被于固相载体的蛋白标志物抗体中固相载体为微孔板。

优选的，所述肽的生物探针材料Pep/PtPd@ZrN@COF的制备方法，包括以下步骤：

1)将ZrCl₄和尿素络合，得到溶胶在惰性气体下600～1000℃下煅烧钝化，得到ZrNNPs；

2)将三(四苯甲醛基)磷、对苯二胺、步骤1)中所述ZrN NPs、1，4-二恶烷和均三甲苯混合，在乙酸作用下，经完全脱气，在100～180℃下反应，得到ZrN@COF；

3)在水合肼催化作用下，将PdCl₂、Na₂PtCl₄、PVP进行反应，获得的铂钯纳米花溶液PtPd ANFs和步骤2)中所述ZrN@COF混合，得到 PtPd@ZrN@COF；

4)将步骤3)中所述PtPd@ZrN@COF的分散液结合蛋白标志物特异性肽，得到Pep/PtPd@ZrN@COF。

优选的，基于电化学生物传感器检测原理，所述包被于固相载体的蛋白标志物抗体中固相载体为金纳米粒子负载的聚苯胺包覆的氧化铈 Au@PDA@BCN复合物电极。