[发明专利]干扰罗氏沼虾IAG基因表达的短链核糖核酸以及其应用

说明书

本申请公开了干扰罗氏沼虾IAG基因表达的短链核糖核酸以及其应用。该短链核糖核酸具有针对罗氏沼虾IAG基因3’‑UTR区的靶向性，能够与IAG基因转录的mRNA特异性结合，抑制IAG基因的表达。该短链核糖核酸可通过导入罗氏沼虾促雄腺体或器官中等方式，在罗氏沼虾性别分化关键时期干扰其雄性IAG基因，可实现雄性罗氏沼虾出现性别逆转形成“新雌性”，这种“新雌性”性成熟后与成年雄虾交配，其产生的后代均为雄性，如此能够在生产中实现全雄养殖可以减少成本投入，提高经济效益。

技术领域

本申请涉及罗氏沼虾IAG基因干扰技术领域，尤其涉及干扰罗氏沼虾IAG基因表达的短链核糖核酸以及其应用。

背景技术

罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)是主要分布于印度洋、太平洋热带及亚热带地区的十足目甲壳类动物，是世界上重要的淡水养殖对虾之一。罗氏沼虾是一种具有相别二态性的虾类，相较于雌性而言，雄性表现出明显的生长优势，成体的体长和体重明显大于雌性个体(A et al.,2006)。促雄腺(androgenic gland,AG)是雄性甲壳动物特有的内分泌器官，研究表明其分泌的胰岛素样雄激素(insulin-like androgenic glandhormone,IAG)参与了雄性第一性征的形成和第二性征的维持(Nagamine,Knight,Maggenti,Paxman,1980)，因此，基于IAG的性别调控技术具有良好的应用潜力。在性别分化关键时期干扰雄性罗氏沼虾IAG基因，可实现雄性罗氏沼虾性别逆转形成“新雌性”，这种“新雌性”性成熟后与成年雄虾交配，其产生的后代均为雄性(Ventura et al.,2011；Ventura et al.,2009)，如此在生产中可实现全雄养殖，可以减少成本投入，提高经济效益。

发明内容

有鉴于此，本申请的目的在于如何实现抑制或者干扰罗氏沼虾IAG基因表达。

第一方面，本申请实施例公开了一种短链核糖核酸，所述短链核糖核酸选自如SEQID NO.1所示序列的核苷酸；或与如SEQ ID NO.1所示序列互补的短链核糖核酸，所述短链核糖核酸用于干扰罗氏沼虾IAG基因的表达。

在本申请实施例中，所述短链核糖核酸作用于所述罗氏沼虾IAG基因的3’-UTR区，3’-UTR区的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

第二方面，本申请实施例公开了一种检测载体，携带第一方面公开的短链核糖核酸作用的所述罗氏沼虾IAG基因3’-UTR区的核苷酸序列，3’-UTR区的核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示。

在本申请实施例中，所述检测载体以pmirGLO双荧光素酶重组质粒为基础构建。

第三方面，本申请实施例公开第二方面所述的检测载体的构建方法，包括以下步骤：

提取罗氏沼虾促雄腺总RNA；

以所述总RNA逆转录得到的cDNA；

PCR扩增所述cDNA得到目的片段，所述目的片段为具有罗氏沼虾IAG基因3’-UTR区的DNA分子；

构建连接有所述目的片段的携带载体；以及

得到所述检测载体；

其中，所述检测载体由以所述携带载体和pmirGLO双荧光素酶报告质粒进行双酶切反应、回收目的片段、重组连接、转化、筛选阳性克隆和质粒提取的步骤得到。

第四方面，本申请实施例公开了一种检测第一方面公开的短链核糖核酸对罗氏沼虾IAG基因表达影响的方法，所述方法包括：

构建含有罗氏沼虾IAG基因3’-UTR区序列的检测载体；

获得第一方面所述的短链核糖核酸；

将所述检测载体和所述短链核糖核酸共转染进入宿主细胞；