[发明专利]用环状RNA circKIF4A与miR-1231序列吸附量来检测细胞癌变程度

说明书

环状RNA circKIF4A序列与miR‑1231特定序列产生吸附作用，通过高通量测序鉴定环状RNA circKIF4A靶向miR‑1231特定序列，吸附作用导致前列腺癌细胞癌变的进程，所述的circKIF4A特定序列的m6A甲基化修饰百分比越高，则导致miR‑1231对前列腺癌细胞铁死亡关键基因的表达抑制越强。

技术领域

本申请属于检测前列腺细胞癌变领域，具体分子机制涉及检测环状RNA腺嘌呤核糖核苷酸碱基A的甲基化修饰的表观遗传学领域。

背景技术

已有研究表明环状RNA circKIF4A(hsa_circ_0007255,circBase)通过吸附miRNA，进而调控肝细胞癌和乳头状甲状腺癌的肿瘤细胞铁死亡。通过非编码环状RNA高通量测序发现在前列腺癌组织和正常组织中显著差异表达的环状RNA，生物信息技术可以从小RNA调控层面分析预测发现，该环状RNA抑制表达的miRNAs。从表观遗传学层面分析这种持久的环状RNA高表达进而吸附miRNA，影响其靶基因对肿瘤细胞铁死亡的调控。

但是在相关科学研究领域RIP实验仍然是分析和验证RNA甲基化的标准。环状RNA与miRNA的海绵吸附机制在非编码RNA调控细胞信号通路常见，已有文献报道在甲状腺癌中铁死亡的机制与海绵吸附相关，但是是因何种原因导致吸附的，现有技术并没有给出分子水平的解释，更加没有深入到转录组层面的表观遗传修饰。

发明内容

发明目的：第一通过高通量测序定量分析circKIF4A在癌细胞和正常组织的表达差异；第二通过生物信息分析技术(分析流程)预测与circKIF4A发生吸附作用的miRNAs；第三通过RIP实验技术衡量circKIF4A一段特定序列上腺嘌呤核糖核苷酸A的甲基化处于超甲基化状态(Hypomethylation)。即本权利保护闭合环状RNA circKIF4A的甲基化修饰揭示了前列腺癌恶性进展的一种崭新的分子调控机制。

技术方案：本技术利用高通量测序技术，RIP技术和生物信息分析技术揭示非编码环状RNA circKIF4A的甲基化修饰上调了circKIF4A的表达，进而促进circKIF4A对miRNA1231的吸附作用，而miRNA1231被抑制表达后会上调前列腺癌肿瘤细胞铁死亡中枢因子GPX4抗氧化酶的功能，进而促进前列腺癌恶性进展。

一种环状RNA circKIF4A序列，其特征在于其序列转录本见NM_012310.5。碱基长度4285个碱基，要求权利保护此circRNA的序列3721至4361处，在此范围内我们可以看到这段序列是富含腺嘌呤核糖核苷酸(A)。要求被保护的circRNA在染色体上对应的位置，位于人类X染色体长臂q13.1处，(chrX:69,549,254-69,553,539，参考UCSC GRCh37/hg19基因组)，如图2所示。被甲基化修饰特定碱基序列如下：

3721 CCAGCTTCTT CTCTGGCTGC TCCCCTATCG AAGAAGAGGC CCACTGAAGTTGGAGTCATC

3781 ATCTCTACCC CCAGTCTGGC TTGGGAGATG CTTTCAGGTT GCAGCCAGAAGGGGTTTTTT

3841 AAATGACTTC TCTGGATTTC AGGTTTCTTG CTGTTGAAAA AAGGAACAAAGCGTTACTGA

3901 AAAGAAGGTA ACCTTTGTTG GATGTGGGCC TTAGCCTCCA GGTCCAGACTACTACTCTAT

3961 GTTCTCCAGA AGGGTGCTAA GTCACCTACT GAAGAGAGAA CCAACTGACTTTCCTATTGA

4021 CTCATCAGGA ACCAGTCCTC AGTCTGGTCA AGTTGTTTCT TATTTGTGAGCAGTTCAGGC