[发明专利]一种提取血液样本中白细胞的方法

说明书

本发明公布了一种提取血液样本中白细胞的方法，用毛细管将离心分层后的微小体积白细胞层拉长放大，在毛细管处注入介质，将微小体积的白细胞层分开取出，包括：采集血液样本；将血液样本放入含有毛细管部件的容器中；将存储有血液样本的容器放入离心机中离心，从而使分散在血液样本中体积占比很小的白细胞组分在毛细管中被富集且为白细胞层被拉长，白细胞层位于红细胞层上方；在毛细管处注入介质，隔开白细胞层；取出白细胞层。本发明可以提高从血液样本中提取出白细胞组分的得率和活性，易于取出白细胞组分，能按照需要高得率或高纯度地提取出全血样本中的白细胞组分，减少红细胞的污染。本发明还可以更容易地提取大体积全血样本中的白细胞。

技术领域

本发明涉及生物学和医学技术领域，尤其是涉及一种提取血液样本中白细胞的方法。

背景技术

正常人外周血液由血浆和血细胞组成，血细胞主要包括红细胞、血小板和白细胞。

白细胞（英文名：leukocyte，white blood cell，简称：WBC）是一类无色、球形、有核的血细胞。正常成人白细胞总数为(4.0～10.0)x 109/L，可因每日不同时间和机体不同的功能状态而在一定范围内变化。白细胞不是一个均一的细胞群，根据其形态、功能和来源部位可以分为三大类：粒细胞（granulocyte）、单核细胞(monocyte)和淋巴细胞(lymphocyte)，其中粒细胞又可根据胞质中颗粒的染色性质不同，分为中性粒细胞、嗜酸粒细胞和嗜碱粒细胞三种 。由多个白细胞组成的群体成为白细胞组分。

白细胞作为人体的免疫细胞，其各成分的生物学特性和物理特性的改变与疾病的发生发展及预后密切相关。但血细胞中白细胞不但体积占比微小，而且数量占比也极低，约为红细胞的千分之一，为稀有成分。更进一步来说，白细胞中的淋巴细胞最频繁地被用于临床和生命科学研究中免疫分析，但是淋巴细胞占白细胞比例约20-40%，淋巴细胞约为红细胞的0.2-0.4‰。因此，对白细胞及其亚群的分析需要将全血中大部分的红细胞去除，提取出白细胞组分。

目前现有技术中，从全血样本中分离白细胞组分的方法主要有两种：全血裂解法和白膜层分离法。

全血裂解法利用红细胞与白细胞结构不同，与白细胞相比，红细胞没有细胞核，对低渗敏感。在全血样本中加入低渗的红细胞裂解液，经过合适的时间后，红细胞裂解成碎片，留下白细胞组分。在实际的操作中，全血裂解法，因为要用大量的低渗溶液裂解红细胞（通常1ml全血样本中需加入10-20ml低渗溶液），而且低渗溶液裂解红细胞的时间不容易控制，裂解时间控制不当会造成部分白细胞的破裂或损伤，从而降低了白细胞的活性。因此，通过全血裂解法提取的白细胞活性低，也不方便通过全血裂解法从大体积（大于等于10ml)全血样本中提取体积占比小的白细胞组分。

白膜层分离法利用红细胞和白细胞成分比重不同，加入一定比重的分层液，比如Ficoll-Hypaque(葡萄糖-泛影葡胺)分层液，用密度梯度离心的方法将单个核细胞（PBMC，包括淋巴细胞和单核细胞）与其他成分分离，离心后，比重大的红细胞和粒细胞位于分层液的下方，血小板等比重小的成分位于分层液上方的血浆中。单个核细胞（PBMC）的比重与分层液相当，位于分层液和血浆的界面上。由此可以去除大部分红细胞，获得白细胞中的单个核细胞（PBMC）。白膜层分离法分离白细胞时，单个核细胞在分层液与血浆的界面上呈现为一层云雾状薄膜，非常难以吸取分离，造成单个核细胞（PBMC）的得率不稳定。再加上必需的洗涤步骤，进一步造成PBMC的丢失。根据文献报道Reimann KA、Chernoff M、Wilkening CL，Clin Diagn Lab Immunol.2000;7:352–359 ，和Hokland P, Heron I，Scand J Immunol.1980;11:353–356.通过白膜层分离法提取白细胞会造成部分淋巴细胞的丢失。并且，白膜层分离法无法获取白细胞成分中的粒细胞，因此不能对粒细胞的特性进行分析。

也就是说，通过现有技术提取白细胞会造成部分白细胞的破裂或损伤或丢失，从而影响白细胞的得率和活性，甚至无法获取白细胞组分中的粒细胞，不能分析粒细胞的特性。