[发明专利]预调节血管细胞用于转导的方法、转导方法和保存转导的细胞的方法

权利要求书

1.人类平滑肌(SM)细胞，所述人类平滑肌(SM)细胞被预调节用于用逆转录病毒核酸构建体或慢病毒核酸构建体转导，所述逆转录病毒核酸构建体或慢病毒核酸构建体包含编码VEGF₁₆₅多肽的多核苷酸序列，其中所述预调节包括使所述SM细胞与0.125mg/ml和0.9mg/ml之间的DEAE-葡聚糖接触，与用1.0mg/ml或更高的DEAE-葡聚糖预调节的类似SM细胞相比，所述SM细胞的特征在于转导后转导率提高和增殖提高中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的人类平滑肌细胞，其中所述逆转录病毒核酸构建体或慢病毒核酸构建体包含SEQ ID NO:1中列出的多核苷酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的人类SM细胞，其中所述预调节用0.125mg/ml-0.5mg/mlDEAE-葡聚糖进行，并且进行1分钟和4分钟之间。

4.根据权利要求1或2所述的人类SM细胞，其中所述预调节用0.125mg/ml DEAE-葡聚糖进行并且进行1分钟。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的人类SM细胞，其中所述接触在包含M199培养基的转导培养基中进行。

6.根据权利要求4所述的人类SM细胞，其中所述转导培养基还包含2mM谷氨酰胺。

7.根据权利要求5或6所述的人类SM细胞，其中所述转导培养基是无血清培养基。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的人类SM细胞，其中所述人类平滑肌细胞选自由以下组成的组：新鲜分离的来自静脉组织的平滑肌细胞、冷冻保存并解冻的来自静脉组织的平滑肌细胞以及培养的人类平滑肌细胞。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的人类SM细胞，其中所述人类平滑肌细胞在所述转导之前和之后被培养在包含平滑肌生长培养基(SmGM)-2 Bullet Kit培养基的培养基中。

10.根据权利要求9所述的人类SM细胞，其中所述生长培养基还包含5％-25％胎牛血清(FBS)。

11.根据权利要求9所述的人类SM细胞，其中所述生长培养基还包含10％-20％胎牛血清(FBS)。

12.根据权利要求9所述的人类SM细胞，其中所述生长培养基还包含15％胎牛血清(FBS)。

13.根据权利要求1-8中任一项所述的人类SM细胞，其中所述人类平滑肌细胞是在包含平滑肌生长培养基(SmGM)-2 Bullet Kit培养基和20％胎牛血清的分离培养基中的从静脉组织分离的平滑肌细胞。

14.人类内皮(EC)细胞，所述人类内皮(EC)细胞被预调节用于用逆转录病毒核酸构建体或慢病毒核酸构建体转导，所述逆转录病毒核酸构建体或慢病毒核酸构建体包含编码血管生成素-1(Ang-1)多肽的多核苷酸序列，其中所述预调节包括：

(a)用包含内皮生长培养基(EGM)^TM-2 Bullet Kit培养基和10％胎牛血清的分离培养基从静脉组织中分离所述EC细胞；

(b)用包含内皮生长培养基(EGM)^TM-2 Bullet Kit培养基的EC培养基培养所述分离的EC细胞，以及

(c)用1.0mg/ml DEAE-葡聚糖预调节所述人类血管内皮细胞，

其中与(EGM)^TM-2 Bullet Kit培养基相比，所述EC细胞的特征在于转导后转导率提高和增殖提高中的至少一种。

15.根据权利要求14所述的EC细胞，其中所述逆转录病毒构建体包含SEQ ID NO:1中列出的核酸序列。