[发明专利]一种芒萁原叶体快速培育成成熟孢子体的方法

权利要求书

1.一种芒萁原叶体快速培育成成熟孢子体的方法，其特征在于，所述方法以芒萁原叶体材料作为繁育基础材料，培育过程采用组培和设施栽培相结合的形式，所述方法包括以下过程：

(1)原叶体发育萌动：将芒萁原叶体材料发育诱导形成萌动的原叶体；

(2)原叶体发育成熟：将萌动的原叶体材料诱导培养成成熟原叶体团或成熟原叶体；

(3)成熟原叶体生成幼孢子体：

将成熟原叶体团分散成单个成熟原叶体，或者2至3个成熟原叶体组成的小团；

设施栽培条件下诱导幼孢子体生成：将单个芒萁成熟原叶体，或者2至3个成熟原叶体组成的小团撒播到诱导培养基中；覆膜保温35℃～40℃培养2个星期，期间浇施特定营养水1次；洒水壶浇水，保证培养基质中原叶体上每3至5天有水滴流动，环境为遮光50％，室温；

(4)幼孢子体发育成成熟孢子：

将幼孢子体通过设施栽培或大田栽培，采用特定培养基质；

依据孢子体生长势，施加野外芒萁根系和土壤浸出液；

每个月浇施一次特定芒萁根系混合水，同时依据孢子体生长势常规施肥。

2.根据权利要求1所述的一种芒萁原叶体快速培育成成熟孢子体的方法，其特征在于，

所述步骤(1)中的芒萁原叶体为通过组培得到的无菌原叶体材料，即原叶体绿色小球体，或无菌条件下芒萁孢子萌发形成的未发育成熟的原叶体，即细小不规则片状原叶体；

所述步骤(1)具体为：将原叶体绿色小球体在无菌条件下分散成0.5mm至1.0mm粒径的小原叶体球；再将小原叶体球转接到原叶体发育诱导培养基中进行原叶体的发育诱导，在无菌培养环境下培养3周，得到萌动的原叶体团；或将孢子萌发出的细小不规则片状原叶体转接到发育诱导培养基，无菌培养3周，得到萌动的单个原叶体。

培养光照强度为2000-3000LX，光照时间为12h/d，温度为23±3℃；

所述原叶体发育诱导的培养基为1/8MS+蔗糖15g/L+琼脂5.6g/L，pH5.4-5.8。

3.根据权利要求1所述的一种芒萁原叶体快速培育成成熟孢子体的方法，其特征在于，所述步骤(2)具体为：将经发育诱导后萌动的原叶体或原叶体团，转接到原叶体发育培养基中进行原叶体的发育培养，在无菌培养环境下培养周，得到芒萁成熟原叶体或成熟原叶体团，发育成熟的原叶体直径大小1～3cm，心形叶片状，有须根；

培养光照强度为2000-3000LX，光照时间为12h/d，温度为23±3℃；

所述原叶体发育培养基为1/2MS+1mg/L NAA+蔗糖15g/L+琼脂5.6g/L，pH5.4-5.8。

4.根据权利要求1所述的一种芒萁原叶体快速培育成成熟孢子体的方法，其特征在于，所述步骤(3)中所述特定营养水配方为：1/2MS+1mg/L NAA++蔗糖30g/L，pH5.4-5.8；所述诱导培养基为V_草炭∶V_蛭虫∶V_腐殖土＝1∶1∶1。

5.根据权利要求1所述的一种芒萁原叶体快速培育成成熟孢子体的方法，其特征在于，所述步骤(4)中所述特定培养基质为V_草炭∶V_蛭虫∶V_腐殖土＝1∶1∶1；

所述特定芒萁根系混合水是指混合了野生芒萁根系土壤、芒萁根粉碎物的混合水；

所述野外芒萁根系和土壤浸出液是指野外生长良好的芒萁植株根系土壤、腐殖层和水的混合物。