[发明专利]一种适用于抗隐花色素4抗体生产的抗原

说明书

本发明公开了一种适用于抗隐花色素4抗体生产的抗原，包含了鸽子隐花色素4蛋白质的抗原核心位点Cry4‑Ctem，抗原核心位点Cry4‑Ctem位于鸽子隐花色素4蛋白质C末端的401‑525位氨基酸，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。通过本发明抗原制备的抗体能够以多方法(包括Western Blot、免疫荧光)特异性地检测内源性、外源性表达的隐花色素4蛋白质，且不与对应物种的其它蛋白质发生交叉免疫反应；此外，由于本抗体所使用抗原与多物种隐花色素4高度同源，因此能够广谱性地检测多物种隐花色素4蛋白质。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种适用于抗隐花色素4抗体生产的抗原。

背景技术

隐花色素4(Cryptochrome4)是一类新发现的、存在于非哺乳类脊椎动物中的光敏蛋白质，具有潜在的光致节律调控功能与光致磁敏效应。抗隐花色素4(Anti-Cryptochrome4)抗体主要用于以免疫印迹、免疫荧光两类方法检测隐花色素4蛋白质。

由于隐花色素4基因发现较晚，市面上尚无商业化的抗Cryptochrome4 抗体。在科研上，抗隐花色素4的抗体主要以长度为15-25个氨基酸的短链多肽作为抗原，在兔、小鼠两类动物中进行了多克隆(J.Biol.Chem.,2012, 287,42634-42641.)、单克隆(Curr.Biol.,2018,28,211-223.e214.)抗体的生产。

然而，使用短肽抗原产生的Anti-Cryptochrome4抗体具有以下几个缺陷：

一是免疫源性差，导致获得的抗体难以适用于多方法对隐花色素4蛋白质进行检测；

二是抗原特异性不足，导致获得的抗体存在与靶标动物其他蛋白质的非特异性交叉免疫反应；

三是种属通用性不足，这是由于来源于单一物种隐花色素4的短肽通常难以普遍性地与其他物种隐花色素4存在高度同源，因此生产的抗体难以广谱性地识别多物种的隐花色素4蛋白质。

发明内容

本发明针对上述技术问题，提供一种适用于抗隐花色素4抗体生产的抗原，对应的Anti-Cryptochrome4抗体可具有高种属通用性、高特异性，且适用于多方法检测隐花色素4蛋白质。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明首先提供了一种适用于抗隐花色素4抗体生产的抗原，包含了鸽子隐花色素4蛋白质的抗原核心位点Cry4-Ctem，抗原核心位点 Cry4-Ctem位于鸽子隐花色素4蛋白质C末端的401-525位氨基酸，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

进一步地，本发明提供的适用于抗隐花色素4抗体生产的抗原，还包含了如SEQ IDNo.1所示的氨基酸序列经替换、缺失、或添加1-50个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

进一步地，本发明提供的适用于抗隐花色素4抗体生产的抗原，为使用大肠杆菌进行表达纯化所获得的蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID No.2 所示，包含了如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。

本发明还提供了一种核苷酸序列，编码上述的适用于抗隐花色素4抗体生产的抗原的氨基酸序列。

本发明还提供了一种抗隐花色素4抗体，通过上述的适用于抗隐花色素4抗体生产的抗原制备。

本发明还提供了一种检测试剂盒，包含上述的适用于抗隐花色素4抗体生产的抗原或包含上述的抗隐花色素4抗体。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：