[发明专利]一种皮肤年轻化蛋白标志物—LRC59蛋白及其无创性提取方法

说明书

本发明公开了一种皮肤年轻化蛋白标志物—LRC59蛋白及其无创性提取方法。公开了LRC59蛋白在辅助判断皮肤年轻化程度中的应用及提取检测方法，旨在从根源上找到皮肤年轻化的内在因素，在皮肤老化外在表现出现前提前干预皮肤衰老，保持年轻化皮肤，另外可以正确判断皮肤的皮肤年轻化程度以及判断皮肤年轻化的生理年龄是否与实际年龄相符，为美容或者医学美容提供参考和方向。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及一种皮肤年轻化蛋白标志物—LRC59蛋白及其无创性提取方法。

背景技术

皮肤年轻化的标准：是皮脂分泌量适中,皮肤既不干也不油,肤色红润细腻,富有弹性,厚薄适中,毛孔较小,对外界的刺激不敏感,PH值为5-5.6。

随着人们生活水平的提高，人们越来越重视皮肤保养，但通常只是关注皮肤衰老的外在表现，比如皱纹、色斑、以及毛孔粗细程度等信息，并由此来判断皮肤的年轻程度，这种判断皮肤年轻程度的方法不能从根源上找到保持皮肤年轻化的原因，无法在皮肤老化外在表现出现前提前干预皮肤衰老，另外正确判断皮肤的年轻程度以及判断衰老的生理年龄是否与实际年龄相符，也是美容或者医学美容的前提。

LRC59(富含亮氨酸的重复序列蛋白59)是一种尾锚蛋白，在其C末端附近具有单个跨膜结构域，该结构域定位于内质网(ER)和核包膜。LRRC59可减少TLR3、8和9介导的信号，但不减少TLR4介导的信号。刺激配体后，LRRC59与UNC93B1的相关性不依赖TLR，这需要配体内在化诱导的信号。内源TLR3的内体定位通过沉默LRRC59而减少，这表明LRRC59在感染后促进了ER介导的UNC93B1介导的NA感性TLR从ER的移位。是DDX58介导的I型IFN信号转导的重要正调节剂。病毒感染后，LRRC59与ISG15相关的DDX58特异性相互作用，并阻止其与LRRC25的结合，LRRC25是将DDX58递送至自噬体的SQSTM1/p62依赖性降解的次级受体，从而导致更强的抗病毒免疫反应，DDX58/RIG-I是病毒RNA的关键模式识别受体，在抗病毒免疫中起着至关重要的作用，并维持免疫稳态。

目前没有将LRC59蛋白(富亮氨酸重复包含59)用于辅助判断皮肤年轻程度的先例。

发明内容

一种无创提取皮肤中LRC59蛋白的方法，该方法包括以下步骤：

(1)受试者表皮皮肤样本取样：将3M医用胶贴贴于前臂曲侧部位，1分钟后，轻轻揭下3M胶贴片，得到胶带状皮肤样品；

(2)干燥的肽段样品的获得：1)将胶带状皮肤样品切成小块，沉积在玻璃板上在转移到离心管；

2)添加不含SDS的适量裂解缓冲液样品，加入2mM EDTA，1XCocktail，然后放在冰5分钟，然后，添加10mM DTT，将样品浸泡过夜；

3)在离心力25,000g，4℃下离心15分钟，回收上清液并用10mM处理DTT在56℃的水浴中放置1小时；

4)然后用55mM IAM处理，在室温黑暗中孵育45分钟，并在25,000g，4℃下离心15分钟，得到最终的蛋白质溶液上清液；蛋白质浓度使用Bradford方法进行测量，提取的蛋白质通过12％的SDS-PAGE进行质控；每份样品取100μg蛋白质，加入胰蛋白酶并于37℃下水解4小时；随后再次以相同的比例添加胰蛋白酶在37℃下酶解8小时；水解产物使用Strata X色谱柱对多肽进行脱盐并在真空下干燥，即得到干燥的肽段样品。

优选地，表皮皮肤样本中LRC59蛋白基于质谱的相对含量的测定方法，包括如下步骤：(1)受试者表皮皮肤样本取样：将3M医用胶贴贴于前臂曲侧部位，1分钟后，轻轻揭下3M胶贴片，得到胶带状皮肤样品；

(2)干燥的肽段样品的获得：1)将胶带状皮肤样品切成小块，沉积在玻璃板上在转移到离心管；