[发明专利]基因工程菌的冻干保藏方法

权利要求书

1.一种基因工程菌的冻干保藏方法，其特征在于，包括以下步骤：

将水熊虫TDP蛋白的基因序列构建到pET-28a表达载体上，获得已导入编码水熊虫TDP蛋白的序列的重组质粒；

将所述重组质粒转入大肠杆菌感受态细胞中，获得已转化的菌液，将所述菌液涂布在LB培养基上；

挑取前一日培养的单克隆菌落，将所述单克隆菌落接种至液体培养基中进行扩大培养，检测所述液体培养基中的菌液的吸光值，获取600nm波长处的吸光值在0.4-0.6之间的待操作菌液；

根据所述待操作菌液的吸光值，取每毫升10^9个细胞的所述待操作菌液进行离心，离心完成后清除上清液，取葡萄糖溶液对菌体沉淀进行吹息，获得混合液；

将所述混合液转移至试管内，将所述试管放入冻干机，依次进行冷冻、真空抽干，从而完成冻干保藏。

2.根据权利要求1所述的基因工程菌的冻干保藏方法，其特征在于，所述大肠杆菌感受态细胞的种类为BL21(DE3)。

3.根据权利要求1所述的基因工程菌的冻干保藏方法，其特征在于，所述检测所述液体培养基中的菌液的吸光值的步骤包括，间隔一段时间多次对所述液体培养基中的菌液的吸光值进行测量。

4.根据权利要求1所述的基因工程菌的冻干保藏方法，其特征在于，所述取每毫升10^9个细胞的所述待操作菌液进行离心的步骤包括，以4000rpm/min的速度进行离心3-6分钟。

5.根据权利要求1所述的基因工程菌的冻干保藏方法，其特征在于，所述取葡萄糖溶液对菌体沉淀进行吹息的步骤包括，取100微升0.3％葡萄糖溶液。

6.根据权利要求1所述的基因工程菌的冻干保藏方法，其特征在于，所述试管为15ml试管。

7.根据权利要求1所述的基因工程菌的冻干保藏方法，其特征在于，所述依次进行冷冻、真空抽干的步骤包括，在-50℃至-90℃条件下冷冻1-3小时。

8.根据权利要求7所述的基因工程菌的冻干保藏方法，其特征在于，所述依次进行冷冻、真空抽干的步骤还包括，在1Pa压强条件下真空抽干6-12小时。

9.根据权利要求1所述的基因工程菌的冻干保藏方法，其特征在于，方法还包括，在完成冻干保藏的样品中加入无菌水将底部固体溶解以完成复苏。

10.根据权利要求9所述的基因工程菌的冻干保藏方法，其特征在于，所述无菌水的体积为0.5-1.5ml。