[发明专利]一种治疗肝纤维化、肝硬化的Wnt3a过表达的M2型骨髓来源巨噬细胞及其应用

说明书

本发明涉及一种治疗肝纤维化、肝硬化的Wnt3a过表达的M2型骨髓来源巨噬细胞及其应用。本发明发现在四氯化碳/2‑乙酰氨基芴诱导的大鼠肝硬化模型，将经典Wnt信号通路配体Wnt3a基因过表达的M2型骨髓巨噬细胞经外周静脉注射后可显著提高其治疗肝硬化的效应，主要表现为显著减轻肝脏炎症反应，抑制肝星状细胞活化，抑制肝祖细胞向胆管上皮细胞分化(胆管反应)，抑制进一步纤维化，进而抑制肝硬化进展。反之，将Wnt3a基因敲减的M2型骨髓巨噬细胞注射后则不仅降低其治疗效应，反而促进肝硬化的进展。因此，M2型骨髓巨噬细胞的Wnt3a基因在肝纤维化、肝硬化治疗中可能发挥关键作用，Wnt3a基因过表达的骨髓巨噬细胞可作为肝纤维化、肝硬化的创新生物或化学治疗药物。

技术领域

本发明属细胞生物学和肝病防治领域，具体地说，涉及一种治疗肝纤维化、肝硬化的Wnt3a过表达的M2型骨髓来源巨噬细胞及其应用。

背景技术

肝硬化是严重危害人民健康和耗费社会资源的难治性疾病。对于失代偿期肝硬化，肝移植是公认有效的治疗手段，但其受制于供体缺乏、费用昂贵以及移植相关并发症和病死率。因此，促进病态肝脏自身结构的重建显得尤为紧迫。

巨噬细胞是组织内稳态的精密传感器，具有高度的可塑性，这有助于其根据环境信号快速地在促炎和抗炎之间进行表型切换。如受来自细菌的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)或损伤、炎症产生的细胞因子等的影响，巨噬细胞经历经典活化并分化为M1巨噬细胞，其特征是产生炎性细胞因子，如TNF-α、白介素-6(interleukin-6,IL-6)以及活性氧等，它们的细胞毒性使得M1巨噬细胞在清除病原体的同时引发炎症反应，尽管这种反应对宿主具有保护作用，但持续的炎症对宿主极为不利。为了保护宿主免受炎症损伤，巨噬细胞可被IL-4和IL-13替代激活并分化为M2巨噬细胞，产生抗炎细胞因子(如IL-10)，主要参与凋亡细胞吞噬、炎症消退、血管生成、组织修复和重塑等。但也有研究(马鹏飞.回输不同极化类型的巨噬细胞对小鼠肝纤维化的治疗作用和机制的研究[D].第四军医大学,2014.)发现小鼠肝纤维化模型尾静脉回输骨髓来源巨噬细胞，小鼠肝脏胶原纤维沉积减少，提示骨髓来源M1型巨噬细胞回输对肝纤维化有较好的治疗效果。

Wnt3a是Wnt信号通路的重要组成之一，属于依赖β-连环蛋白(β-catenin)的经典Wnt信号通路。有研究(Cheng Jh,She H,Han YP,et al.Wnt antagonism inhibitshepatic stellate cell activation and liver fibrosis[J].Am J PhysiolGastrointest Liver Physiol,2008,294(1):G39-G49.)报道Wnt3a在激活的肝星状细胞中呈较高表达，相比静止HSCs上调3％～12％。还有研究(Zhou S,Eid K,GlowackiJ.Cooperation between TGF-beta and Wnt pathways during chondrocyte andadipocyte differentiation of human marrow stromal cells[J].J Bone Miner Res,2004,19(3):463-470.)显示，TGF-β/samd2/3信号通路依赖β-catenin促进HSCs激活转化为肌成纤维细胞，Wnt3a能上调这一信号通路表达而促进HSC激活，并增加依赖smad的TGF的自分泌而促进激活转化后的肌成纤维细胞的分化，最终导致HSC的激活及肌成纤维细胞的分化增加。

目前关于利用Wnt3a过表达的M2型骨髓来源巨噬细胞治疗肝纤维化、肝硬化未见报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种Wnt3a过表达的M2型骨髓来源巨噬细胞。

本发明的再一的目的是，提供所述Wnt3a过表达的M2型骨髓来源巨噬细胞的用途。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：