[发明专利]一种应用vismodegib使鼠类多生牙的方法

说明书

本发明属于牙科领域，尤其涉及鼠类多生牙的研究。一种应用vismodegib使鼠类多生牙的方法，其特征是,将鼠类雌雄于发情期合笼，次日检测雌鼠，如见雌鼠有阴栓，则定为E0.5天，并将其与雄性鼠类分开饲养，在雌性孕鼠怀孕天数至E15.0‑17.0天，将vismodegib通过单次灌胃给药的方式进入孕鼠体内。本发明创造性地将治疗肿瘤的Vismodegib用于鼠类多生牙研究，通过灌胃的方式给予孕鼠vismodegib，诱导小鼠第二牙列发育、萌出产生稳定的舌侧多生牙表型。经诱导的小鼠可以自然生长、牙齿自行萌出至成年，尚未发现其他的身体畸形。所建立小鼠多生牙的模型，周期短，经济成本低，可重复性强。

技术领域

本发明属于牙科领域，尤其涉及鼠类多生牙的研究。

背景技术

本发明所述的多生牙是指多于现有牙齿数目的牙齿，研究认为多生牙形成可能是挽救了退化的牙齿或者是诱导含有成牙上皮能力的干细胞发育而成。

目前人类治疗牙齿缺失的办法有：可摘义齿、固定义齿或者是种植义齿等，但是这些修复义齿仍然与天然牙之间存在着明显差异，因此如果能通过牙齿再生来治疗牙齿缺失，无疑是人类的福音。牙齿再生研究者甚多，暂无结果。目前现有研究发现通过转基因手段诱发小鼠的残余连续性牙板持续高表达Wnt信号通路可以诱发局部上皮进一步发育形成牙齿样的结构(Popa E,Buchtova M,Tucker A.Revitalising the rudimentaryreplacement dentition in the mouse.Development(Cambridge,England).2019；146(3). https://doi.org10.1242/dev.171363.)如图1箭头所示，为通过转基因手段诱导小鼠残余连续性牙板上皮增殖发育形成牙蕾样的结构组织，但是文章中报道其并未观察到牙齿自然萌出，说明了残余连续性牙板具有诱导成牙的潜能。

不同物种牙齿的再生能力不同，多牙列动物具有无限的牙齿再生能力，双牙列物种具有有限的牙齿再生能力，人类是双牙列，其牙齿具有有限的再生能力。人们将第一副牙列称为乳牙，第二副牙列称为恒牙，而第三牙列则是指多于第二牙列的牙齿。研究发现第一牙列起源于牙板上皮，而第二牙列的发育起源于连续性牙板上皮，其中连续性牙板上皮是一种位于第一牙列舌侧的牙板上皮结构。人们发现无论是牙板上皮还是连续性牙板均含有牙源性上皮的干细胞。通过对小鼠第一牙列的研究，人们发现小鼠也存在着类似的连续性牙板结构。

发明内容

牙再生是治疗牙齿缺失的最佳办法，本发明的目的在于通过研究多生牙发育机制有望进一步实现牙再生的梦想，本发明提供一种应用vismodegib使鼠类多生牙的方法，以推进牙再生的实现。

本发明所采用的技术方案为一种应用vismodegib使鼠类多生牙的方法，其特征是, 将鼠类雌雄于发情期合笼，次日检测雌鼠，如见雌鼠有阴栓，则定为E0.5天，并将其与雄性鼠类分开饲养，在雌性孕鼠怀孕天数至E15.0-17.0天，将vismodegib通过单次灌胃给药的方式进入孕鼠体内。

Vismodegib是一种Hh信号通路抑制剂，目前已经被FDA批准由于临床治疗多种实体肿瘤的药物，对基底细胞癌、肺癌、胰腺癌、结直肠癌等有疗效。研究表明其可以抑制肿瘤细胞的生长，本发明创造性地将Vismodegib用于鼠类多生牙研究，通过灌胃的方式给予孕鼠vismodegib，可以诱导小鼠第二牙列发育、萌出产生稳定的舌侧多生牙表型。

单次灌胃的方式给予孕鼠vismodegib的量为(150mg/kg-200mg/kg)。在150mg/kg可以诱导产生50％以上的舌侧多生牙小鼠，而随着浓度增加我们发现部分小鼠在E15.5时给予200mg/kg可以诱导小鼠接近100％的舌侧多生牙。

所述的鼠类为小鼠。

所述的小鼠为野生型。

雌雄以1:1比例进行合笼。雌雄比例可以为3-1:1，而1:1的比例有助于提高雌鼠的受孕率。