[发明专利]从骆驼乳粉中提取纯化DNA的方法，及应用所述方法的骆驼乳粉的检测方法

说明书

本发明涉及从骆驼乳粉中提取纯化DNA的方法，其通过柱式深加工产品基因组DNA抽提试剂盒从骆驼乳粉中提取纯化DNA，所述方法包括裂解操作时，采用裂解液GMP Buffer和冰冻300μl异丙醇以提高裂解成功率，最终得到含有纯化DNA的核酸溶液。本发明还涉及一种骆驼乳粉的检测方法，通过上述方法从乳粉中获得含有纯化DNA的核酸溶液，然后采用Nanodrop微量分光光度计测定核酸溶液的浓度和纯度，采用PCR扩增方法对核酸溶液的总基因组进行物种鉴定。本发明的方法操作简单，可从体细胞含量很低的乳粉中获得纯化的核酸，后续用于PCR扩增实验中。本发明的方法具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于基因纯化检测技术领域，具体涉及一种从骆驼乳粉体细胞中提取纯化DNA的方法。

背景技术

骆驼乳被认为是生活在干旱地区的人们的丰富营养来源，也是沙漠地区牧民的基本生计来源。具有一定的低过敏性、降血糖、抗氧化、保肝、抗炎、抗菌等作用，尤其适合老年人和糖尿病患者，成为大众喜爱的优质健康产品。为了保持其物理、化学和营养特性，通常将骆驼乳生产并加工成骆驼乳粉，以延长其保质期。

与其他畜乳相比，骆驼乳产量较低，每日只能挤出约1.5-2.5kg，因此骆驼乳是一种非常不易获得的珍贵乳类，这也使得骆驼乳的价格在不断升高。在经济效益的驱动下，不少商贩将低价乳类掺加到骆驼乳及骆驼乳粉中，以降低成本提高利益。

目前已建立了多种检测方法来来检测乳及乳制品的掺假，这些方法通常使用乳中的蛋白质、脂质和DNA作为检测目标。由于乳粉是热加工制成的产品，蛋白质和脂肪极易变性，而DNA具有较高的热稳定性和特异性，因此DNA分子成为了基于PCR方法对乳粉进行物种鉴定的目标化合物。

骆驼乳中DNA和PCR反应的底物来源于挤乳时掉落在乳中的骆驼体细胞，包含了白细胞(98％-99％)和为数不多的乳腺上皮细胞(约1％-2％)。与组织样品和血液样品相比，由于乳中的体细胞远远少于组织和血液中的细胞，且含有较多的脂肪和蛋白质杂质，因此从乳及乳粉中提取DNA极为困难。针对乳或乳粉中DNA含量过低的问题，目前在生物分子学技术研究领域的DNA提取方法主要包括：NaOH裂解法、PBS加热法、直接煮沸法、EDTA裂解法，然而这些方法的操作都较复杂。

发明内容

本发明的目的提供一种从骆驼乳粉体细胞中提取纯化DNA的方法，并将该方法应用于骆驼乳粉的检测鉴定。

本发明的思路是采用优化后的柱式深加工产品基因组DNA抽提试剂盒从骆驼乳粉体细胞中提取纯化DNA，实现步骤简单地从骆驼乳粉体细胞中成功提取纯度高、质量稳定的核酸，并确认所得骆驼乳粉体细胞DNA可用于PCR扩增，以实现骆驼乳粉的物种鉴定。

本发明提供一种从骆驼乳粉中提取纯化DNA的方法，其通过柱式深加工产品基因组DNA抽提试剂盒从骆驼乳粉中提取纯化DNA，所述方法包括以下步骤：

(1)称取600-700mg骆驼乳粉样品于2ml离心管中，加入1ml裂解液GMO Buffer和20μl Proteinase K蛋白酶，震荡混匀，在65℃水浴锅裂解1h；

(2)水浴结束后，离心吸取上清液，12000rpm下离心3min，转移上清液至新的2ml离心管中，向上清液加入400μl氯仿，充分混匀后离心吸取上清液，在 12000rpm下离心5min，再转移上清液至新的2ml离心管中，再次加入400μl氯仿，充分混匀再次离心取上清液，在12000rpm下离心5min，转移上清液至新的 2ml离心管中；

(3)向步骤(2)得到的产物中加入等体积的裂解液GMP Buffer，充分混匀后加入300μl异丙醇，充分混匀后室温静置30min；

(4)将步骤(3)得到的产物取700-800μl转移至吸附柱中，室温放置2min 后离心，在12000rpm下离心30s，再将滤液倒入吸附柱后再离心弃滤液，在 12000rpm下离心30s，将吸附柱放回收集管中；