[发明专利]抑制维氏气单胞菌感染的重组蛋白质及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了制备含有重组蛋白质的方法，该重组蛋白质为a)或b)或c)或d)：a)由序列表序列1第1至381位的氨基酸序列组成的蛋白质；b)由序列表序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；c)在a)或b)所示的蛋白质的羧基端或/和氨基端融合蛋白标签得到的融合蛋白；d)将序列表序列1第1至381位所示的氨基酸序列经过一个以上的氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与a)或b)或c)的蛋白质具有80％以上的同一性且的具有相同活性的蛋白质。以本发明的重组蛋白质免疫动物后可使动物产生较高的血清抗体水平，并且可抵抗维氏气单胞菌的攻击。可作为诊断抗原、制备成单克隆抗体或进一步对蛋白功能与构象关系进行研究。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及抑制维氏气单胞菌感染的重组蛋白质及其制备方法与应用。

背景技术

养殖鱼类病害严重制约了水产养殖的健康高效发展，其中气单胞菌引起的鱼类出血病是水产养殖业发展过程中急需攻克的传染性疾病。出血病具有发病快、流行性强、死亡率高等特点，这种病对多种鱼类、多年龄段鱼类、多种养殖水域都会造成危害。一旦爆发对鱼类养殖造成巨大的经济损失。其中维氏气单胞菌的气溶素(aerolysin) 可以引发鱼类的肠道损伤，从而使得病原菌穿透肠道屏障进入周身系统，引起感染和败血症。这时安全高效防治措施显得尤为重要。在早年的生产养殖中，抗生素药物是防治气溶素出血病的主要手段。随着科技的发展和生活水平的日益提高，水产品中的药物残留已不仅是行业内部着力研究的问题，也在消费者中引起了的广泛关注，成为食品卫生与公共安全的热点问题。因此，免疫学技术的应用是养殖水生动物疾病防控研究的主要趋势。疫苗的使用，不但可以预防水产动物疾病，提高水产养殖鱼类机体的特异性免疫水平，也符合无药物残留、不污染环境的新要求，成为研发与生产的主流产品。

发明内容

本发明所要解决的一个技术问题是如何获得抑制气单胞菌感染的蛋白质疫苗。

为解决上述技术问题，本发明提供了制备重组蛋白质的方法。

本发明所提供的制备重组蛋白质的方法，所述方法包括使重组蛋白质的编码基因在生物中进行表达得到所述重组蛋白质的步骤；所述生物为微生物、植物或非人动物；

所述重组蛋白质为a)或b)或c)或d)：

a)氨基酸序列是序列表序列1第1至381位或第2至381位的蛋白质；

b)氨基酸序列是序列表序列1第1至387位或第2至387位的蛋白质；

c)在a)或b)的蛋白质的羧基端或/和氨基端融合蛋白标签得到的融合蛋白；

d)将序列表序列1第1至381位或第2至381位所示的氨基酸序列经过一个以上的氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与a)或b)或c)的蛋白质具有80％以上的同一性且的具有相同活性的蛋白质。

上述方法中，序列表中序列1由387个氨基酸残基组成，其中第1至381位或第 2至381位为无毒气溶素结构域，第382-387位为His标签。

上述方法中，蛋白标签是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和/或纯化等。

本文中，所述蛋白标签(protein-tag)是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白质一起融合表达的一种多肽或者蛋白质，以便于目的蛋白质的表达、检测、示踪和/ 或纯化。所述蛋白质标签可为Flag标签、His标签、MBP标签、HA标签、myc标签、 GST标签和/或SUMO标签等。