[发明专利]一种牛血清外泌体用于干细胞培养的方法

说明书

本发明公开了一种牛血清外泌体用于干细胞培养的方法，包括以下步骤：在干细胞培养基内加入预设量的牛血清，再额外加入预设浓度的牛血清外泌体。本发明所提供的牛血清外泌体用于干细胞培养的方法，优化了干细胞培养条件，能够改善干细胞的生长状态。在不需要提高牛血清加入量的情况下，能够增加牛血清外泌体的含量，为干细胞生长提供更多的活性成分及营养物质。同时不会引入过多油脂、激素、抗生素等杂质因子，减少对干细胞的影响。另外，通过额外加入牛血清外泌体，能够减少因牛产地不同、牛血清分离工艺不同、牛血清批次不同等因素造成的牛血清差异，有利于干细胞的稳定培养。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种牛血清外泌体用于干细胞培养的方法。

背景技术

间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)是一种成体干细胞，它存在于脐带、骨髓、脂肪和脐带血等一些组织中，具有很强的自我更新及多胚层分化能力。研究表明间充质干细胞在免疫调节和促进组织修复方面疗效显著，其已经大量用于类风湿性关节炎、红斑狼疮、移植物抗宿主病、肝纤维化等多种重大疾病的临床研究和治疗上。脐带间充质干细胞是从足月分娩断脐后的新生儿脐带中提取，具有来源丰富、不伤及身体、增殖能力强、具有多胚层分化能力、免疫原性低等优点，已经得到了越来越多专业人士的认可和应用。

在脐带干细胞培养时，一般会选用DMEM培养基作为基础培养基，然后添加一定浓度的牛血清(5％-15％不等)。现有培养方法中，当牛血清添加比例太少时，细胞生长和贴壁状态不好。而当提高牛血清浓度时，牛血清中含有的油脂、激素、抗生素等杂质小分子物质的含量也会提高，一方面这些杂质小分子的具体含量和功能不确定，另一方面，油脂会使细胞代谢产物谱发生变化及可导致补体含量的提高，激素会加速干细胞分化，这些因素均不利于细胞的培养。此外，这些杂质因子会屏蔽牛血清中活性成分的功能。且牛产地不同、牛血清分离工艺不同、牛血清批次不同等因素均会导致不同牛血清之间的差异，这些不稳定的因素不利于干细胞的稳定培养。

也就是说，现有的用牛血清进行干细胞培养时存在以下缺陷：(1)牛血清浓度低时，细胞生长和贴壁不好；牛血清浓度高时，会带入更多的血清杂质因子，影响细胞培养；(2)不同牛血清具体成分差异较大，不利于干细胞稳定培养。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种牛血清外泌体用于干细胞培养的方法，优化了干细胞培养条件，能改善干细胞的生长状态。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

一种牛血清外泌体用于干细胞培养的方法，包括以下步骤：在干细胞培养基内加入预设量的牛血清，再额外加入预设浓度的牛血清外泌体。

进一步地，牛血清的加入量为所述干细胞培养基用量的3～10％；额外加入的牛血清外泌体在所述干细胞培养基中的浓度为1.0×10⁸～1.0×10⁹particals/mL。

进一步地，所述牛血清外泌体为采用试剂盒提取获得的外泌体。

进一步地，所述牛血清为胎牛血清，所述牛血清外泌体为胎牛血清外泌体。

进一步地，所述干细胞为间充质干细胞，优选地为脐带间充质干细胞。

进一步地，采用组织培养法进行干细胞培养。

进一步地，在干细胞的原代培养中额外加入预设浓度的牛血清外泌体；或，在干细胞的传代培养中额外加入预设浓度的牛血清外泌体。

进一步地，包括以下步骤：将组织块接种在培养容器中，向所述培养容器中添加干细胞培养液，再额外加入牛血清外泌体，额外加入的牛血清外泌体在所述干细胞培养液中的浓度为1.0×10⁸～1.0×10⁹particals/mL；然后将培养容器置于培养箱中培养，培养过程中每次更换培养液时，都在培养液中额外加入相同浓度的牛血清外泌体。