[发明专利]一种用于治疗CNV的miRNA及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种用于治疗CNV的miRNA及其制备方法和应用。本发明所述用于治疗CNV的miRNA的序列如序列表SEQ ID No:1所示；所述制备方法为首先将样品进行处理，得到样品细胞，提取所述样品细胞中的总RNA，之后进行反转录，得到反转录产物，将所得反转录产物进行实时荧光定量PCR检测，得到所述用于治疗CNV的miRNA。本发明还提供一种包含所述miRNA的慢病毒表达载体和药物制剂，以及所述miRNA和包含所述miRNA的慢病毒表达载体在药物制备中的应用。本发明利用所述miRNA调控ECs表达“一对多”的生物学特性，达到多角度高效治疗CNV的目的，为基因疗法治疗CNV提供全新的思路和策略。

技术领域

本发明属于基因药物技术领域，尤其涉及一种用于治疗CNV的miRNA及其制备方法和应用。

背景技术

脉络膜新生血管（CNV）是指来自脉络膜的病理性新生血管增生并穿过Bruch膜向内生长，侵入视网膜下腔，继而引发渗出、出血及瘢痕形成等一系列病理改变。至少与40余种眼部疾病相关，包括变性、炎症和外伤等。如年龄相关性黄斑病变、病理性近视黄斑变性、特发性CNV、眼组织胞浆菌病综合征以及眼外伤等。CNV多见于黄斑部，是一种常见的眼部新生血管疾病的共同的体征，已成为≥50岁人群失明的主要原因，应早期发现并及时处理。CNV形成包括原位血管内皮细胞（ECs）增生、移行的血管生成和骨髓来源的血管内皮祖细胞（EPCs）参与的血管发生两种形式，后期血管重塑/纤维化则与ECs内皮间充质转化（EndoMT）密切有关。现阶段多以抗血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）药物为代表作为临床治疗CNV疾病的一线治疗方案。该方案以抑制新生血管形成为目的，虽使患者生活质量明显改观，但临床疗效有限、复发率高，甚至有加重纤维瘢痕形成的风险。

miRcoRNAs是一种重要的非编码基因，可以调控30%的蛋白编码基因，通过与其靶mRNA分子的3’UTR区互补结合，特异性抑制靶基因的表达。人类miR-655基因位于14号染色体，属于miR-154家族。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种用于治疗CNV的miRNA及其制备方法、包含所述miRNA的慢病毒表达载体、包含所述miRNA的药物制剂以及所述miRNA和包含所述miRNA的慢病毒表达载体在制备治疗CNV药物中的应用。本发明所述miRNA调控ECs表达“一对多”的生物学特性，达到多角度高效治疗CNV的目的，为基因疗法治疗CNV提供全新的思路和策略。

目前认为，CNV有两种形成方式：血管生成（angiogenesis）和血管发生（vasculogenesis）。前者是指原有血管内皮细胞（Endothelial Cells，ECs）经历萌芽、增生、移行而构成新的管腔结构；后者是骨髓来源的血管内皮祖细胞（endothelialprogenitor cells，EPCs）在特定环境下被激活，并被募集、诱导分化参与新生血管的构建。既往国内外研究多侧重于揭示早期CNV生成机制，取得重要进展，并转化形成以抗血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）药物为代表的临床治疗CNV疾病的一线治疗方案。该方案以抑制新生血管生成，但无法抑制骨髓来源的EPCs介导的病理性血管的发生，导致疗效有限、复发率高，甚至有加重纤维瘢痕形成的风险，究其原因与未能同时抑制血管生成和血管发生两个关键的过程且未涉及血管形成后期的血管重塑或纤维化等重要环节相关。