[发明专利]靶向Tfap2a基因的小干扰RNA及其在制备治疗慢性疼痛药物方面的应用

说明书

本发明涉及用于研究、诊断和治疗对转录因子激活蛋白‑2α（TFAP2A）基因表达和/或活性的调节响应和/或调节TFAP2A基因表达通路的性状、疾病或状况的化合物、组合物和方法。本发明公开了两组靶向人和小鼠TFAP2A基因的siRNA及其在慢性疼痛治疗中的应用。通过设计并合成三组靶向TFAP2A基因的siRNA，体外实验表明其中两组siRNA能够有效降低TFAP2A基因的表达。本发明的实施例验证了这两组siRNA可以显著抑制外周神经损伤诱导产生的机械性痛觉过敏和热痛觉过敏；将其鞘内注射入神经病理性疼痛模型小鼠，分子生物学实验表明该siRNA能够在体内显著降低小鼠背根神经节中Tfap2a的表达升高。本发明为慢性疼痛治疗药物的研发提供了新靶点和新方法。

技术领域

本发明属于生物医疗领域，涉及用于研究、诊断和治疗对转录因子激活蛋白-2α(TFAP2A)基因表达和/或活性的调节响应和/或调节TFAP2A基因表达通路的性状、疾病或状况的化合物、组合物和方法；具体涉及一种靶向Tfap2a(转录因子激活蛋白-2α)基因的小干扰RNA及其在制备治疗慢性疼痛药物方面的应用。

背景技术

慢性疼痛是由感觉神经系统疾病或神经损伤引起的，如癌症、帕金森病、糖尿病等都能引起慢性疼痛。慢性疼痛主要包括三叉神经痛、卒中后神经痛、坐骨神经痛等，临床特征包括自发痛、痛觉过敏和触诱发痛等。其病程通常超数月，在消除或控制致痛因素后仍存在疼痛，容易引发认知障碍、焦虑、抑郁等精神疾病，严重影响了患者的生活质量。统计学表明，神经病理性疼痛影响着7-10％的普通人群，且随着人口老龄化、糖尿病流行和癌症生存率提升，其患病率预计将以每年0.82％的速率增长。但是慢性疼痛的病因多种多样，致病机制比较复杂，其基础研究认识有限，临床上仍缺乏有效的镇痛药物。目前治疗药物主要有麻醉性镇痛药、解热消炎镇痛药、催眠镇痛药、抗癫痫药和抗抑郁药。多数止痛药会对人体健康造成一定的副作用，如肝功能损害、消化不良、头晕等。慢性疼痛的疼痛程度严重，而治疗效果并不理想，且持续存在，因而寻找新型有效的预防治疗药物靶点，是目前亟待解决的问题。

小分子干扰RNA(small interfering Ribonucleic Acid，siRNA)是一种双链RNA，可以造成目的mRNA特异性降解，从而使基因转录后沉默，参与RNA干扰。在疾病治疗中，使siRNA进入细胞内，干扰特定疾病基因RNA的功能，使蛋白质的翻译停止而起到基因治疗的作用。和传统临床治疗药物相比，siRNA药物毒副作用小、效率高，是一种最具潜力的基因治疗方法。在2018年，美国食品和药物管理局就已批准Alnylam制药公司的产品Onpattro(patisiran)，用于治疗成年患者由遗传性转甲状腺素介导的淀粉样变性引起的周围神经疾病。近年来，针对多种疾病的siRNA已经相继进入临床试验的不同阶段。

经发明人研究发现，在脊神经结扎(Spinal Nerve Ligation,SNL)损伤诱导的神经病理性疼痛小鼠模型的背根神经节(Dorsal Root Ganglion,DRG)中的Tfap2a的mRNA和蛋白表达均显著上调。

发明内容

本发明的目的是提供一种靶向Tfap2a基因的小干扰RNA及其在制备治疗慢性疼痛药物方面的应用，能有效下调或抑制TFAP2A蛋白的表达，进而调控下游基因的表达。

为实现上述发明目的，本发明的实施例提供一种抑制Tfap2a基因表达的小干扰RNA，其特征在于，至少包括Tfap2a siRNA 1和Tfap2a siRNA 2；其中，

Tfap2a siRNA 1：

正义序列：5′-GGGAGAGCGAAGUCUAAGAAUTT-3′；

反义序列：5′-AUUCUUAGACUUCGCUCUCCCTT-3′；

Tfap2a siRNA 2：

正义序列：5′-GCCAAAGCAGUAGCAGAAUUUTT-3′；