[发明专利]测定人血浆中溴夫定浓度的方法

说明书

本发明属于医药检测技术领域，公开一种测定人血浆中溴夫定浓度的方法，步骤如下：配制溴夫定标准曲线储备液、质控储备液和内标储备溶液；使用溴夫定标准曲线储备液配制溴夫定标准工作液，用制备好的溴夫定标准工作液和空白基质配制标准曲线血浆样品；用质控储备液配制溴夫定质控工作液，用制备好的溴夫定质控工作液和空白基质配制质控样品；用内标储备溶液配制内标工作溶液；采用LC‑MS/MS法对标准曲线血浆样品、质控样品和内标工作溶液进行测定，获得标准曲线方程；采用LC‑MS/MS法对未知生物样品进行测定，根据标准曲线方程确定未知生物样品中溴夫定的含量。本发明克服了较低浓度水平的精准定量检测的缺陷，能满足较小给药量时生物体内的含量测定要求。

技术领域

本发明涉及医药检测技术领域，具体涉及一种测定人血浆中溴夫定浓度的方法。

背景技术

溴夫定，是用于治疗免疫功能正常的成年急性带状疱疹患者的药品。

带状疱疹是由潜伏的水痘-带状疱疹病毒(VZV)重新激活引起的感染性皮肤病，好发于中老年人，常表现为沿感觉神经支配的区域形成单侧皮疹，并伴有神经病理性疼痛。随着我国人口老龄化趋势日益加重，带状疱疹的发病率呈显著上升趋势，带状疱疹的防治已经成为重要的公共卫生问题。溴夫定为一无药理活性的物质，进行一系列的磷酸化，在细胞内的磷酸转化过程由病毒胸苷激酶催化，最终形成溴夫定三磷酸盐，可以抑制VZV的复制。

溴夫定抗病毒活性是阿昔洛韦和喷昔洛韦的200-1000倍，且是单次治疗方案，半衰期长，起效快，肾功能不全患者应用溴夫定无需剂量调整，针对带状疱疹病毒具有高度的选择性，能明显降低带状疱疹后遗神经痛的发生风险。具有极大的临床优势。

现有发表的检测血浆中溴夫定的方法有HPLC-UV或毛细管电泳，在实际运用过程中存在检测时间过长、灵敏度不足等局限性。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种测定人血浆中溴夫定浓度的方法，采用LC-MS/MS法测定人血浆中溴夫定浓度，克服了较低浓度水平的精准定量检测的缺陷，能满足较小给药量时生物体内的含量测定要求，检测过程中信噪比符合标准要求，无杂质峰的干扰，测定的药物的含量准确度高。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一方面，本发明提供一种测定人血浆中溴夫定浓度的方法，包括如下步骤：

步骤一：配制溴夫定标准曲线储备液、质控储备液和内标储备溶液；

步骤二：使用溴夫定标准曲线储备液配制溴夫定标准工作液，用制备好的溴夫定标准工作液和空白基质配制标准曲线血浆样品；用质控储备液配制溴夫定质控工作液，用制备好的溴夫定质控工作液和空白基质配制质控样品；用内标储备溶液配制内标工作溶液；

步骤三：采用LC-MS/MS法对溴夫定标准曲线血浆样品、质控样品和内标工作溶液进行测定，获得标准曲线方程；采用LC-MS/MS法对未知生物样品进行测定，根据标准曲线方程确定未知生物样品中溴夫定的含量。

进一步地，所述溴夫定标准曲线储备液的配制方法如下：称取溴夫定，加入甲醇溶解后制得。进一步地，所述溴夫定标准曲线储备液的浓度为1mg/mL。

进一步地，所述溴夫定标准曲线血浆样品的配制方法如下：取溴夫定标准曲线储备液采用浓度为50％的甲醇水溶液进行配制成溴夫定标准工作液，用制备好的溴夫定标准工作液和空白基质配制标准曲线血浆样品。进一步地，所述溴夫定标准工作液的浓度范围为200～80000ng/mL。

进一步地，所述标准曲线血浆样品的浓度范围为10～4000ng/mL。