[发明专利]基于同分异构体的特异性结合靶点蛋白的筛选方法

说明书

基于同分异构体的特异性结合靶点蛋白的筛选方法，利用炔基活性酯作为桥联剂，通过化学方法对氨基纳米磁球进行炔基化修饰，得到炔基化磁球，基于正交反应原理，将炔基化磁球投入不同组给药组的细胞蛋白中发生点击反应，所述给药组包括活性不同的同分异构体的给药组，并对SDS‑PAGE电泳条带进行质谱分析，分别筛选出各给药组结合的相关蛋白并使用String对其相互作用进行分析，从而判断具靶点蛋白。

技术领域

本发明涉及药物化学技术领域，特别是涉及一种基于同分异构体的特异性结合靶点蛋白的筛选方法。

背景技术

药物的靶点确认最常用的方法是磁球捕获法，但是在应用磁球捕获药物的特异性靶点蛋白的过程中，必定会出现非特异性结合，“钓取”出假阳性蛋白的情况。活性分子大多数具有同分异构体，它们的生物活性与其立体结构有着内在的联系。利用活性差异的同分异构体鉴别法是辨别靶点蛋白，排除非特异性吸附蛋白的有效方法。因此为了排除非特异性的干扰，将药物修饰成两种活性各异的衍生物，作为一种同分异构体对捕获的靶点蛋白进行比较，从而可以筛选出特异性结合的蛋白，准确找出特异性的靶点蛋白。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中存在的技术缺陷，而提供一种特异性结合靶点蛋白的筛选方法。

本发明的另一方面，19-叠氮穿心莲内酯和14-叠氮穿心莲内酯在基于同分异构体的靶点蛋白鉴别中的应用。

为实现本发明的目的所采用的技术方案是：

利用活性不同的同分异构体在磁性捕获中的差异进行筛选特异性结合靶点蛋白的方法

在上述技术方案中，利用炔基活性酯作为桥联剂，通过化学方法对氨基纳米磁球进行炔基化修饰，得到炔基化磁球，基于正交反应原理，将炔基化磁球投入不同组给药组的细胞蛋白中发生点击反应，所述给药组包括活性不同的同分异构体的给药组，并对SDS-PAGE电泳条带进行质谱分析，分别筛选出各给药组结合的相关蛋白并使用String对其相互作用进行分析，从而判断具靶点蛋白。

在上述技术方案中，活性不同的同分异构体通过以下方法验证：在双荧光素酶报告基因系统检测中，通过计算相对荧光比率，判断活性。

本发明的另一方面，19-叠氮穿心莲内酯和14-叠氮穿心莲内酯在基于同分异构体的靶点蛋白鉴别中的应用。

在上述技术方案中，利用10^-5M的19-叠氮穿心莲内酯和14-叠氮穿心莲内酯具有不同的抗炎活性，鉴别靶点蛋白的种类。

在上述技术方案中，所述靶点蛋白为具有穿心莲内酯抗炎作用机制的靶点蛋白。

在上述技术方案中，利用炔基活性酯作为桥联剂，通过化学方法对氨基纳米磁球进行炔基化修饰，得到炔基化磁球，基于正交反应原理，将炔基化磁球投入不同组给药组的细胞蛋白中发生点击反应，所述给药组包括19-叠氮穿心莲内酯给药组和14-叠氮穿心莲内酯给药组，并对SDS-PAGE电泳条带进行质谱分析，分别筛选出各给药组结合的相关蛋白并使用String 对其相互作用进行分析，从而判断具有穿心莲内酯抗炎作用机制的靶点蛋白。

在上述技术方案中，所述19-叠氮穿心莲内酯(19-azide-AG)通过以下方法制备：

步骤1，将原料穿心莲内酯AG溶于二氯甲烷中，加入2,2-二甲氧基丙烷和吡啶对甲苯磺酸盐，搅拌反应完成后，将反应液中加入乙酸乙酯和NaHCO₃水溶液洗涤，有机相干燥浓缩得中间体1；

步骤2，将中间体1溶于DMF中，加入咪唑和叔丁基二甲基硅烷基氯(TBDMSCl)室温搅拌，反应完成后，将反应液中加入乙酸乙酯和水溶液萃取，有机相干燥浓缩得中间体2；

步骤3，将中间体2溶于MeOH中，加入对甲苯磺酸，冰浴搅拌，随后加入乙酸乙酯和水溶液萃取，有机相干燥浓缩得中间体3；