[发明专利]一种新型冠状病毒的T细胞免疫检测方法

权利要求书

1.一种多肽组合物，其特征在于，所述多肽组合物由S1多肽库、S2多肽库、M多肽库、N多肽库中的任意一个以上的多肽库组成；

所述S1多肽库由氨基酸序列如SEQ ID NO.87～SEQ ID NO.178所示的多肽组成，S2多肽库由氨基酸序列如SEQ ID NO.179～SEQ ID NO.271所示的多肽组成，M多肽库由氨基酸序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.29所示的多肽组成，N多肽库由氨基酸序列如SEQ IDNO.30～SEQ ID NO.86所示的多肽组成。

2.根据权利要求1所述的多肽组合物，其特征在于，所述多肽组合物能与MHC-I或MHC-II类分子结合，其中，当多肽组合物与MHC结合时能被CD4⁺或CD8⁺T细胞识别。

3.权利要求1所述的多肽组合物在制备用于评估新冠患者、新冠康复者或新冠疫苗接种者细胞免疫水平的产品中的应用。

4.一种评估新冠患者、新冠康复者或新冠疫苗接种者细胞免疫水平的试剂盒，其特征在于，含有权利要求1或2所述多肽组合物。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还设置有酶联免疫斑点技术检测板，检测板上预包被捕获T细胞分泌的细胞因子的单克隆抗体。

6.一种评估新冠患者细胞、新冠康复者或新冠疫苗接种者免疫水平的非疾病诊断目的的检测方法，其特征在于，使用权利要求1或2所述多肽组合物刺激新冠患者的PBMC细胞，细胞在体外扩增之后，然后使用ELISpot检测多肽刺激后是否出现斑点，即IFN-γ的释放。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述方法的步骤如下：

(1)分离样品中的外周血单个核细胞；

(2)培养扩增步骤(1)的外周血单个核细胞；

(3)取IFN-γ捕获抗体进行包被，孵育，加入封闭液封闭；

(4)去除封闭液，加入多肽组合物和步骤(2)的外周血单个核细胞，孵育，洗涤，去除液体；

(5)加入IFN-γ单克隆抗体，孵育，去除上清，洗涤；

(6)加入亲和素-HRP结合物，孵育，去除上清，洗涤；

(7)检测并读取斑点。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述方法中设置有阴性对照；阳性对照的刺激溶液为佛波酯。

9.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述方法步骤(2)中培养扩增所述的外周血单个核细胞，包括以下步骤：

(1)取外周血单个核细胞，加入培养基和肽库溶液，孵育；

(2)加入含有白介素7的培养基，孵育；

(3)加入含有白介素2的培养基，孵育；

(4)离心，收集沉淀的细胞，洗涤，静息，即得扩增的外周血单个核细胞。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述培养基为含10％胎牛血清的RPMI1640培养基；所述IL-7的浓度含量为15-25ng/mL；所述IL-2的浓度含量为175～225U/mL。