[发明专利]一种高特异性识别APE1的寡核苷酸适配体APT-D1及其制备方法和应用

说明书

一种高特异性识别APE1的寡核苷酸适配体APT‑D1及其制备方法和应用，属于分子生物医药技术领域。本发明提供了寡核苷酸适配体APT‑D1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。还提供了其在制备治疗癌症疾病药物中的应用；其在制备癌症诊断试剂盒或生物传感器中的应用；其在制备判断癌症分期或分型药物、癌症诊断试剂中的应用；一种抗癌药物包含寡核苷酸适配体APT‑D1；一种试剂盒包含寡核苷酸适配体APT‑D1。本专利首次筛选出所述核酸适配体APT‑D1，能够特异性识别结直肠癌血清中过表达的APE1，并且能够抑制APE1的DNA损伤修复功能。本发明方法简单，迅速，灵敏。

技术领域

本发明属于分子生物医药技术领域，具体涉及一种高特异性识别APE1的寡核苷酸适配体APT-D1及其制备方法和应用。

背景技术

脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶1/氧化还原因子1(apurinic/apyrimidinicendonuclease1/redox factor-1，APE1/Ref-1，后文简称APE1)是一种参与碱基切除修复(BER)途径的多功能酶。APE1能够特异性识别并切割位点脱嘌呤嘧啶位点(AP位点)，从而进行DNA的修复过程,可准确去除受损碱基，并保证基因组完整性。APE1的失调被证明与多种癌症有关，APE1在大多数恶性肿瘤中高表达或胞浆异位表达，被认为是恶性肿瘤的重要标志物。APE1与肿瘤的发生、发展及预后相关，可能成为极具潜力的肿瘤基因治疗的新靶点。

指数富集的配基系统进化技术，简称SELEX(Systematic Evolution of Ligandsby Exponential Enrichment)技术，是近十几年迅速发展起来的高通量生物文库筛选技术。应用大容量的随机寡核苷酸适配体文库(ssDNA或RNA)，结合实时荧光PCR技术，筛选出逐步富集的寡核苷酸，经反复体外筛选、扩增，最终获得与靶标分子结合呈高特异性、高亲和力的寡核苷酸适配体。

核酸适配体是在体外通过指数富集的配基系统进化技术(SELEX)从人工合成的DNA或RNA文库中筛选出来的一小段寡核苷酸，具有高亲和力强特异性结合靶标分子的优点，并且适配体分子量小，免疫原性低，化学修饰性强，应用领域广等。消减筛选是通过去除与非目标靶蛋白识别的一系列寡核苷酸，筛选出与非目标靶蛋白不结合但与目标靶蛋白特异性结合的寡核苷酸，然后再将其应用到后序实验中。这样将消减筛选应用到复合靶标筛选中会大大降低筛选难度，从而提高成功率。

现有技术大多是基于ELISA的方法使用抗体来检测血清中的APE1，但是抗体尺寸大、生产成本高、批间差异大、免疫原性高、热稳定性差，而适配体具有低免疫原性、组织穿透力强、易于化学合成与修饰等优势，且与其靶标的结合具有较好亲和力和特异性，可像抗体一样实现肿瘤的免疫治疗，但是现在没有针对APE1的适配体被筛选出来。

本课题组首次以APE1为靶标，通过SELEX技术筛选特异性核酸适配体，采用PCR法监测筛选过程，通过对适配体亲和力和特异性分析，表明适配体APT-D1与APE1具有良好的亲和力和特异性，进一步验证了适配体APT-D1与结直肠癌血清具有良好的亲和力和特异性。

发明内容

针对上述现有技术中存在的问题，本发明的目的在于设计提出一种高特异性识别APE1的寡核苷酸适配体APT-D1及其制备方法和应用。应用包括作为试剂盒的组成部分或检测指标和制备生物传感器，用于癌症的早期辅助诊断或进行癌症相关疾病发生、发展进程相关的基础研究。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

一种高特异性识别APE1的寡核苷酸适配体APT-D1，其特征在于所述寡核苷酸适配体APT-D1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。