[发明专利]稳定呼吸道合胞病毒融合蛋白的方法

权利要求书

1.一种灭活呼吸道合胞病毒(RSV)且稳定所述RSV病毒中的pre-F蛋白的方法，其包括以下步骤：

(1)提供包含活的RSV病毒的宿主细胞；

(2)使用选自下列的固定剂对所述包含活的RSV病毒的宿主细胞进行固定和灭活：甲醛溶液，和多聚甲醛溶液；其中，甲醛的浓度按重量计为0.0069％-0.1185％(w/w)；多聚甲醛的浓度按重量计为0.0173％-1％(w/w)；和

(3)从步骤(2)的产物中去除所述固定剂，从而获得灭活的RSV病毒；

优选地，在步骤(1)中，通过下述步骤来提供活的RSV病毒：(1a)用RSV病毒感染宿主细胞；(1b)在允许RSV病毒增殖的条件下，培养步骤(1a)获得的经感染的宿主细胞；和(1c)收集步骤(1b)获得的经培养的宿主细胞，其包含活的RSV病毒；优选地，在步骤(1c)中，在收集所述经培养的宿主细胞之前，对所述经培养的宿主细胞进行洗涤；

优选地，所述宿主细胞为贴壁细胞或悬浮细胞，例如哺乳动物(例如啮齿类动物和灵长类动物，例如鼠、猴和人)的呼吸道上皮细胞、肝细胞、肺细胞、肾细胞、宫颈细胞、卵巢细胞、骨细胞、乳腺细胞、横纹肌细胞、胃上皮细胞、皮肤表皮细胞、成纤维细胞和前列腺细胞；

优选地，所述活的RSV病毒位于所述宿主细胞的表面。

2.权利要求1的方法，其中，在步骤(2)中，所述固定剂为甲醛溶液，并且甲醛的浓度为0.0069％-0.1185％，例如0.0069％-0.0104％，0.0104％-0.0156％，0.0156％-0.0234％，0.0234％-0.0244％，0.0244％-0.0351％，0.0351％-0.0527％，0.0527％-0.079％，0.079％-0.0977％，或0.0977％-0.1185％；

优选地，在0-40℃的温度(例如0-4℃，4-10℃，10-15℃，15-20℃，20-25℃，25-30℃，30-35℃，35-37℃，或37℃-40℃；例如4℃，25℃或37℃)下，使用甲醛溶液来对所述包含活的RSV病毒的宿主细胞进行固定和灭活；

优选地，使用甲醛溶液来对所述包含活的RSV病毒的宿主细胞进行固定和灭活，持续0.5-48h(例如，0.5-1h，1-5h，5-12h，12-24h，或24-48h)；

优选地，使用浓度为0.0069％-0.1185％(例如0.0069％-0.0104％，0.0104％-0.0156％，0.0156％-0.0234％，0.0234％-0.0244％，0.0244％-0.0351％，0.0351％-0.0527％，0.0527％-0.079％，0.079％-0.0977％，或0.0977％-0.1185％)的甲醛溶液来对所述包含活的RSV病毒的宿主细胞进行固定和灭活，持续0.5-24h；或者，使用浓度为0.0104％-0.1185％(例如0.0104％-0.0156％，0.0156％-0.0234％，0.0234％-0.0244％，0.0244％-0.0351％，0.0351％-0.0527％，0.0527％-0.079％，0.079％-0.0977％，或0.0977％-0.1185％)的甲醛溶液来对所述包含活的RSV病毒的宿主细胞进行固定和灭活，持续不超过48h。