[发明专利]一种八色荧光光谱校准试剂及其制备方法

权利要求书

1.一种八色荧光光谱校准试剂的制备方法，其特征在于，具体过程为：

S1、人工合成8条模板DNA，每条模板DNA均包含不同引物的结合位点；8条模板DNA的序列信息分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8所示；

S2、设计和确定8对荧光引物，荧光引物对1、荧光引物对2、荧光引物对3、荧光引物对4、荧光引物对5、荧光引物对6、荧光引物对7、荧光引物对8的序列信息分别为SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10，SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12，SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20、SEQ IDNO：21和SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：24，并且其5’端荧光标记分别为FAM、HEX、NED、NH598、NH618、NH650、NH635、NH670；

S3、将步骤S1人工合成的8个模板DNA进行混合得到模板混合物；

S4、将步骤S2中的8对荧光引物对进行混合得到引物混合物；

S5、将PCR缓冲液、步骤S3得到的模板混合物、步骤S4得到的引物混合物混合，然后进行PCR扩增，得到八色荧光光谱校准试剂。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述模板混合物中按100μL体系计含有8条模板DNA各10μL以及PCR级水20μL。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，参与混合的8条模板DNA的浓度均为1ng/μL。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S4中，按100μL体系计，所述引物混合物中含有6.5μL荧光引物对1、6.25μL荧光引物对2、6μL荧光引物对3、5μL荧光引物对4、5μL荧光引物对5、4.0μL荧光引物对6、4.5μL荧光引物对7、3.25μL荧光引物对8，以及59.5μLPCR级水或TE^-1。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，参与混合的8对荧光引物对的浓度均为2μM。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S5中，PCR扩增体系按20μL体系计，包括5×PCR反应缓冲液4μL、引物混合物10μL、模板混合物1μL和PCR级水5μL。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S5中，PCR循环参数条件为首先95℃下初始孵育激活5分钟，然后以95℃反应20s、59℃反应1min、72℃反应30s为一个循环，循环27-28次，再60℃下终延伸20分钟，最后在4℃下保温。

8.利用权利要求1-7任一制备方法制备得到的八色荧光光谱校准试剂。