[发明专利]一种用于肝癌的食蟾虫脂质体的制备方法

说明书

本发明公开了一种用于肝癌的食蟾虫脂质体的制备方法的制备方法，先通过将老鹰茶、木香微波提取，得提取物；再将食蟾虫、鳕鱼子打浆并加入维生素E、胆固醇，得浆液；最后将提取物与浆液混合，超声，过滤，加磷酸盐缓冲液，水化成脂质体溶液并挤出装置反复挤压，干燥，得到粉状食蟾虫脂质体；所制备的食蟾虫脂质体粉末联合索拉非尼从多种抑制方式共同抑制肝细胞癌的生长繁殖，对耐药肝细胞癌具有加强治疗效果，此外，所设计的挤出装置通过圆形齿轮和不规则齿轮圈联动的方式反复将脂质体溶液通过过滤片，最终得到的脂质体粒径较小并均匀，操作简单，省时省力。

技术领域

本发明涉及食蟾虫加工领域，特别是涉及一种用于肝癌的食蟾虫脂质体的制备方法。

背景技术

原发性肝癌(primarylivercancer)是世界上第五常见的恶性肿瘤，在肿瘤相关死亡的原因中位列第四，每年约有84万的新发病例，其中，肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是其重要是组织学类型(占其75％-85％)，具有高侵袭性和高致死率的特点，早期肝癌多采取手术切除，但肝癌切除术后5年复发率仍高达70％，且大多数患者于术后2年内复发，不可切除的肝细胞癌(HCC)患者通常接受多激酶抑制剂索拉非尼或轮伐替尼，然而药物耐药及不良反应使得患者的生存获益受限，近年来，以免疫检查点抑制剂(ICIs)为代表的免疫治疗取得了很大进展，然而HCC生物学行为的异质性导致仅有25％的患者产生持久的治疗反应，尽管其他治疗方式如消融治疗、经导管肝动脉化疗栓塞术(TACE)也取得了很大进展，但高的复发率使得HCC患者5年生存率仅有18％。

索拉菲尼是晚期HCC的一线用药，也可通过抑制systemXc-进而导致GSH耗竭诱导铁死亡来治疗肝细胞癌，但由于其耐药性的存在，仅有部分肝癌患者能从中获益。如何更好的提高索拉非尼的疗效，改善索拉非尼耐药造福更多的肝癌患者是当下需要解决的一个问题。

由于很多脂溶性药物活性成分难溶于水，导致其生物利用度较低，有效血药浓度维持时间较短，毒副副反应大，脂质体给药系统具有缓释性和靶向性等优点，其良好的给药效果受到了人们的广泛关注。

发明内容

针对上述情况，本发明之目的在于提供一种食蟾虫脂质体的制备方法，直接用木香、老鹰、食蟾虫和鳕鱼子为主要原料制备成的食蟾虫脂质体，所制备的食蟾虫脂质体与索拉非尼联合使用，能有效提高索拉非尼的疗效，改善肝细胞癌对索拉非尼的耐药性，减少复发率。

其解决的技术方案是：

一种用于肝癌的食蟾虫脂质体的制备方法，由以下步骤制备：S1，将老鹰茶、木香粉碎研磨，过100目筛，加入乙醇溶液，室温浸泡2-3h后，400W微波40-60min，8000-10000r/min离心10-15min，取上清液，过滤，浓缩，冷冻干燥，然后研磨成粉末，过300目筛，得提取物；S2，将食蟾虫、鳕鱼子用流水清洗干净，晾干，打浆均匀，加入维生素E、胆固醇搅拌均匀，得浆液；S3，向提取物中加入浆液、乙醇，12-16kHz超声30-40min，减压抽滤，得滤液，将滤液减压除去乙醇后，再加入磷酸盐缓冲液，32-35℃下水化成脂质体溶液，利用鳕鱼子中的卵黄高磷蛋白、卵黄脂磷蛋白、卵磷脂以脂质体的形式包裹老鹰茶和木香粉提取物以及食蟾虫中的活性药物成分，然后将脂质体溶液加入挤出装置的料筒中，然后通过压力泵压入到挤出管道内，通过电机带动齿轮使脂质体溶液反复通过滤膜，得到粒径较小并均匀的脂质体混悬液，将得到脂质体混悬液在喷雾或冷冻保护剂作用下，直接喷雾或冷冻干燥，得到粉状食蟾虫脂质体；

进一步的，所述的挤出装置包括料筒，料筒通过压力泵压连通挤出管道，挤出管道内设有PC滤膜和不锈钢微孔滤板，挤出管道内还设有不规则齿轮圈，不规则齿轮圈与挤出管道外部的圆形齿轮齿合，圆形齿轮连接电机，通过电机带动齿轮使脂质体溶液反复通过滤膜。

进一步的，步骤S1中所述的老鹰茶:木香:乙醇溶液的质量体积比为：100-120g:80-100g:600-1000mL；所述的乙醇溶液的浓度为70-80%。