[发明专利]同时表达IFNa14蛋白和人乙肝病毒S蛋白的重组酿酒酵母菌株及制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种同时表达IFNa14蛋白和人乙肝病毒S蛋白的重组酿酒酵母菌株及制备方法和应用，其包含HBVs蛋白的1位至200位氨基酸，包含IFNα14的24位至190位氨基酸。本发明将两种表型整合至一个酵母菌株中，获得能够同时表面展示HBVs蛋白和分泌IFNα14蛋白的重组酵母菌株JDY52‑HBVs‑IFNα14。用于制备乙肝病毒口服疫苗，通过口服途径激发机体保护性免疫反应，并借助酵母细胞壁多糖对机体先天性免疫系统的调节作用，发挥更加有效的免疫保护。与现有的疫苗比较，口服重组酵母制剂成本低、可实现大规模放大生产，安全可靠，具有良好的应用开发前景，为乙型肝炎病毒的免疫和治疗提供选择。

技术领域

本发明属于生物基因工程技术领域，涉及表达IFNa14蛋白和人乙肝病毒S 蛋白的重组酿酒酵母菌株的制备方法和应用。

背景技术

乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)感染导致的一种全世界流行的疾病，特别是在发展中国家，发病率及死亡率一直很高^[1]。HBV只有3200bp，是一个相当小的病毒。其基因组共有四个ORF，编码以下一些蛋白：Core蛋白和pre-core蛋白，Pol蛋白，X蛋白，以及S蛋白(L，M，S)。Core是核衣壳蛋白；Pre-core现在不知道有何功能，它对病毒的复制不是必要的，但是可能与抑制宿主的免疫反应有关；X蛋白对病毒复制是重要的，还与肝癌的发生有关； S蛋白是病毒的包膜蛋白，与病毒进入细胞有关^[2]。

IFN-α2作为研究最多的亚型，已被用于治疗慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染，具有治疗时间有限、病毒学应答持续的优点，但其疗效仍相对较低。研究发现， IFN-α14是抑制HBV共价闭合环状DNA转录和HBV e抗原/HBV表面抗原产生最有效的亚型，中位抑制浓度值约为传统IFN-α2的100倍^[3]。

比较成熟的异源蛋白表达系统包括酵母细胞、原核表达系统和杆状病毒昆虫细胞表达系统。相较于后两者，酵母细胞兼具成熟的翻译后修饰能力和培养周期短、安全、便捷、生产成本低等优势^[4]。利用酵母表面展示技术(Yeast surface display, YSD)将外源蛋白展示于酵母细胞表面，可制备口服型保护制剂；利用酵母分泌表达蛋白技术，分泌表达治疗型蛋白，起到治疗的效果。同时酵母细胞壁多糖对机体的免疫系统具有调节作用，可抗病毒、增强免疫功能，促进免疫器官发育，因而酵母口服制剂的开发具有良好的应用前景。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种同时表达IFNα14和乙肝病毒HBVs蛋白的重组酵母菌株，可将其用于口服制剂的研制。

本发明的目的之二在于提供所述口服重组酵母菌株的制备方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现的：

一种同时表达IFNα14和人乙肝病毒S蛋白的重组酿酒酵母菌株， JDY52-HBVs-IFNα14，其包含HBVs蛋白的1位至200位氨基酸，包含IFNα14的 24位至189位氨基酸。

一种乙肝病毒S蛋白的截断体，优选为第1至200位氨基酸，序列特征为 SEQ IDNo.1。

一种IFNα14蛋白的截断体，优选为第24至189位氨基酸，序列特征为SEQ ID No.2。

表达所述乙肝病毒S蛋白截断体的基因，是从第1位至600位碱基，其核苷酸序列为SEQ ID No.3。构建所述重组酵母的质粒GPD-HBVs-TU，序列特征为SEQ ID No.5，由上述基因片段和POT-GPD-TU载体组成；

表达所述IFNα14蛋白截断体的基因，是从第70位至567位碱基，其核苷酸序列为SEQ ID No.4。构建所述重组酵母的质粒GPD-IFNα14-TU，序列特征为SEQ ID No.6，由上述基因片段和POT-GPD-TU载体组成。