[发明专利]一种基于基因编辑技术创制水稻新型两系不育系的方法

权利要求书

1.一种基于基因编辑创制水稻新型两系不育系的方法，其特征在于，所述的方法为利用CRISPR/Cas9技术定点编辑两系不育系水稻中控制籼粳杂种胚囊败育基因S5，通过造成S5的移码突变，敲除水稻S5基因，获得具有广亲和特性的两系不育系水稻。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：针对两系不育系S5基因的信号肽编码区域设计两对靶点，构建含有靶点序列的pCRISPR/Cas9-S5-gRNA重组表达载体，将重组表达载体利用农杆菌介导的方法转化水稻两系不育系，使两系不育系中的S5基因的信号肽缺失或使该基因的功能丧失，从而获得具有广亲和特性的两系不育系水稻。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的两系不育系为Bph68s。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的两对靶点分别为靶点1和2、靶点3和4，其序列分别为：

1)靶点1：TACTCAGGGGCAGGATTCGT，

2)靶点2：GTAGCAGCTGCAGCTGCAAC；

3)靶点3：AGTCATTGTTACTCAGGGGC，

4)靶点4：GGGACACTCCAACTCGTCGT。

5.通过权利要求1-4任一项所述的方法得到的两系不育系水稻在育种中的应用，其特征在于，将得到的两系不育系水稻作为母本与两系恢复系父本配成两系杂交水稻组合，进行杂交制种。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的两系恢复系父本包括9391、7375武科粳、南粳83111、南粳83043、金香玉1号、宁香粳11。

7.一种使水稻S5基因信号肽缺失或使水稻S5基因功能丧失的基因编辑位点，其特征在于，为靶点1和2、靶点3和4，其序列分别为：

1)靶点1：TACTCAGGGGCAGGATTCGT，

2)靶点2：GTAGCAGCTGCAGCTGCAAC；

3)靶点3：AGTCATTGTTACTCAGGGGC，

4)靶点4：GGGACACTCCAACTCGTCGT。

8.权利要求7所述的基因编辑位点在制备杂交水稻两系不育系材料中的应用。