[发明专利]一种用于糖化血红蛋白分离的色谱填料的制备方法

说明书

本发明提供一种用于糖化血红蛋白分离的色谱填料的制备方法，包括：乳化后的溶液A在惰性气体保护下原位聚合；然后轮流加入乳化后的溶液B和乳化后的溶液C进行原位沉积和交联获得所述用于糖化血红蛋白分离的色谱填料；溶液A包括2wt％～40wt％第一单体、0.5wt％～5wt％引发剂、0.5wt％～15wt％稳定剂，余量为水；溶液B包括5wt％～40wt％第三单体、1wt％～30wt％第四单体和0.5wt％～5wt％引发剂，余量为水；溶液C包括0.5wt％～15wt％的稳定剂，余量为水。其从而达到简化操作流程、缩短制备周期、降低生产成本、减少污染浪费的目的。

技术领域

本发明涉及色谱填料领域，特别是涉及一种用于糖化血红蛋白分离的色谱填料。

背景技术

糖尿病在我国的发病率逐年提高，因血糖控制差引起的致残、致死案例不断增多。糖化血红蛋白(HbA1c)由于其能体现患者近2个月的血糖情况，对于帮助医生更好的评估病人病情具有较大帮助，因此其作为糖尿病患者的血糖监测指标在临床上被广泛认可。

目前测定糖化血红蛋白的方法主要包括高效液相离子交换色谱法、硼酸亲和层析法、免疫分析法等。其中高效液相色谱法已被临床医生作为评估糖尿病血糖控制水平的相对金标准。高效离子交换色谱法主要利用不同成分的血红蛋白带电性的不同，与其填料的结合力大小的不同而实现分离。

糖化血红蛋白分离填料以小粒径单分散亲水聚合物颗粒为主，此外还有少量的生物大分子填料和硅胶填料，其中单分散聚合物填料的制备以种子溶胀法和分散聚合法为主。

种子溶胀法是由Ugelstad J.于90年代初提出，主要是利用乳液聚合制备的颗粒作为种子，然后用单体、交联剂、溶胀剂等进行多步溶胀、聚合，从而得到粒径更大的聚合物颗粒。专利CN1412554A采用种子溶胀法合成了氯甲基化聚苯乙烯-二乙烯基苯基质微球，并在其基础上通过胺化和表面沉积制备得到磺酸化的单分散阳离子填料。但聚苯乙烯-二乙烯基苯颗粒由于其表面较强的疏水性容易对生物大分子产生不可逆吸附，从而导致分离效果下降。同样的，专利CN1132213A采用一步种子溶胀法制备了聚苯乙烯交联微球和聚乙烯吡啶交联微球，但是同样没能避免不可逆吸附的问题。专利CN110314664A和专利CN1785526A也都采用种子溶胀法制备得到可用于糖化血红蛋白分析的单分散色谱填料，它是主要利用亲水性单体等对种子颗粒进行溶胀聚合，从而制得表面亲水的单分散色谱填料。虽然一定程度上降低了填料对蛋白分子的不可逆吸附，但是填料制备过程依然复杂。总之，种子溶胀法的优点是制备的填料颗粒较为均一，缺点则是整个制备过程操作繁琐，条件苛刻，周期过长，成本过高，产生的废液过多等。

分散聚合主要通过在反应前将单体、甲醇或乙醇等有机溶剂、油溶引发剂等混合为均一的体系，升温引发反应后，聚合物单体开始聚合并达到一定分子量后析出并缠绕，最终形成一定大小的聚合物颗粒。分散聚合法主要用于制备非交联以及低交联聚合物颗粒。在利用分散聚合法制备聚苯乙烯-二乙烯基苯交联微球的过程中，当采用一次投料来制备交联聚苯乙烯微球时，交联剂二乙烯基苯的比例不能大于1％，否则将会使得制备得到的颗粒均一性下降，呈多分散状态，严重的可能导致物料结块而使反应彻底失败。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种用于糖化血红蛋白分离的色谱填料的制备方法，其简单、高效、低成本、环保用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明是通过以下技术方案获得的。

本发明提供一种用于糖化血红蛋白分离的色谱填料的制备方法，包括如下步骤：

乳化后的溶液A在惰性气体保护下原位聚合；然后轮流加入乳化后的溶液B和乳化后的溶液C进行原位沉积和交联获得所述用于糖化血红蛋白分离的色谱填料；