[发明专利]测定人血浆中辛伐他汀、β-羟酸辛伐他汀的方法

权利要求书

1.一种测定人血浆中辛伐他汀、β-羟酸辛伐他汀的方法，所述相关代谢产物为β-羟酸辛伐他汀，其特征在于，包括如下步骤：

(1)血浆样品预处理，包括辛伐他汀、β-羟酸辛伐他汀样品处理步骤；

(2)标准曲线和质控血浆样品的配制：

空白生物基质的配制：空白人血浆+200mM乙酸铵(pH4.5)＝1:1(v/v)配制得到；

使用乙腈配制标曲和质控工作溶液，所述工作溶液为辛伐他汀、β-羟酸辛伐他汀工作溶液，取上述工作溶液10μL与490μL空白生物基质混合配制成不同浓度的标准曲线样品和质控样品，用辛伐他汀、β-羟酸辛伐他汀和内标的峰面积比和标准样品的浓度来建立标准曲线，得到相应的线性回归方程；

(3)采用液相色谱-质谱联用检测；

(4)待测血浆中各物质的浓度测定：

将待测血浆按步骤(1)样品制备的方法制备，取待测样品按步骤(3)采用液相色谱-质谱联用检测的方法检测，将测得的辛伐他汀、β-羟酸辛伐他汀和各自内标的峰面积比值代入所建的标准曲线中，计算得到待测血浆中辛伐他汀、β-羟酸辛伐他汀的浓度。

2.根据权利要求1所述的测定人血浆中辛伐他汀、β-羟酸辛伐他汀的方法，其特征在于，所述步骤(1)血浆样品预处理具体步骤为：

在黄光室温条件下，移取200μL待测样品至2mL离心管中，再加10μL氘代混合内标工作溶液，加入1200μL的MTBE，将样品涡旋5分钟后，在10000rpm、4℃条件下离心5分钟，用移液枪移取上清液1000μL至新的96孔板中，在25℃条件下氮气流吹干；加入200μL的含0.1％甲酸水：乙腈(1:1)溶液复溶，涡旋3分钟，在4000rpm、4℃条件下离心5分钟，得到待测样品。

3.根据权利要求1所述所述的测定人血浆中辛伐他汀、β-羟酸辛伐他汀的方法，其特征在于，所述步骤(3)的检测条件如下：

①液相色谱条件：色谱柱：XSelect C18 2.1*50mm 3.5μm；

流动相：水相：0.1％乙酸水，有机相：0.2％甲酸乙腈，洗针液：甲醇:水(1:1)；

柱温：室温；自动进样器温度：4℃；

采用水相和有机相为混合流动相进行梯度洗脱，每个样品采集时间为4min，进样体积为10μL，流速为0.6mL/min，流动相梯度洗脱参数如下：0min，50％有机相；2.1min，85％有机相；2.9min，85％有机相；2.91min，50％有机相；4min，停止。

②质谱条件：在电喷雾电离检测模式下，采用多反应监测的质谱扫描模式，其中辛伐他汀采用正离子模式，β-羟酸辛伐他汀采用负离子模式，离子化电压(IS)分别为3000V和-4500V，离子源温度(TEM)：500℃，气帘气(CUR)：35psi，入口电压(EP)分别为10V和-10V，碰撞气(CAD)：9psi，雾化气(Gas1)：50psi，涡轮气(Gas2)：45psi，离子对分别为：m/z 441.3→325.2(SV)，m/z 447.3→325.2(SV-d₆)，m/z 435.31→319.18(SVA)，m/z 441.3→319.1(SVA-d₆)。