[发明专利]基于气味结合蛋白的电化学传感器及其构建方法和应用

权利要求书

1.基于气味结合蛋白的电化学传感器的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将预处理后的多孔纳米氧化铝孔道浸泡在三（2-羧乙基）膦盐酸盐水溶液中，常温避光48～72小时进行修饰改性得到纳米孔阵列；

2）用足量的超纯水冲洗后氮气吹干，使用等体积的EDC/NHS溶液活化所修饰的纳米孔阵列10～20分钟，活化后用饱和碳酸氢钠溶液调节pH，使pH=7~8；

3）向已活化好的多孔纳米氧化铝孔道中加入人气味结合蛋白溶液，最后，将板孔中的溶液通过振荡器振荡混合2～5分钟，并将它们放在低温4～10℃下孵育2~3小时；

4）达孵育处理时间后用PBS缓冲液冲洗以除去未反应的EDC/NHS溶液和未结合的蛋白质，得到基于气味结合蛋白的电化学传感器。

2.根据权利要求1所述的基于气味结合蛋白的电化学传感器的构建方法，其特征在于，所述三（2-羧乙基）膦盐酸盐水溶液的浓度为5mM～6mM，所述EDC/NHS溶液为EDC溶液和NHS溶液的混合溶液，所述EDC溶液的浓度为6mg/mL～8mg/mL，由EDC溶解在MES缓冲液制得，EDC溶液用量为50～100μL；所述NHS溶液的浓度为12mg/mL～16mg/mL，由NHS溶解在PBS缓冲液制得，NHS溶液用量为50～100μL；所述MES缓冲溶液为：MES、NaCl，pH=5～6，所述PBS缓冲溶液pH=7～8。

3.根据权利要求1所述的基于气味结合蛋白的电化学传感器的构建方法，其特征在于，所述人气味蛋白溶液浓度为10μg/mL～30μg/mL。

4.权利要求1-3任一项所述的构建方法构建得到的基于气味结合蛋白的电化学传感器，所述电化学传感器是将人气味结合蛋白修饰在纳米氧化铝孔道上获得，所述多孔纳米氧化铝孔道孔径 为40-70nm，所述人气味结合蛋白为hOBP 2B。

5.权利权利4所述的基于气味结合蛋白的电化学传感器在检测水果香味物质中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用具体包括：将待检测目标分子溶解于一定体积分数甲醇溶液中，配制得一系列浓度的目标分子溶液，将所制备得到的电化学传感器利用自制的三电极体系采用电化学方法检测目标分子，得到相应的浓度梯度变化曲线，每一个浓度的目标分子测量后，将测试的目标分子溶液从纳米氧化铝孔道中取出，用电化学工作站电流-时间方法检测每一目标物质的电流随时间的变化曲线，最后通过变化曲线上的电流信号得出目标物质的浓度。

7.权利要求5所述的应用，其特征在于，所述待检测目标分子为香草醛、月桂酸或/和乙酸乙酯，所述目标分子浓度为0.1pg/mL~10pg/mL；所述甲醇溶液的浓度为体积分数为1%~10%甲醇水溶液，所述自制的三电极体系为铂电极作对电极，饱和甘汞电极作参比电极，氧化铝孔道，铂片和铜电极一起作为工作电极，所述电化学检测所用电解液为K₃[Fe(CN)₆]和KCL的等体积比的混合溶液。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，将制备的电化学传感器同实际样品放置在密闭的容器里一段时间，检测操作同标准气味物质溶液的检测一致，利用电化学检测的电流信号来反映相应气味物质的含量。

9.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述实际样品为香蕉时，其中气味中含量最多的是乙酸乙酯，通过该传感器检测从青色生香蕉到黄色熟香蕉过程中的乙酸乙酯含量。