[发明专利]一种血液中苯并[a]芘的大通量快速检测方法及应用

权利要求书

1.一种血液中苯并[a]芘的大通量快速检测方法，其特征在于，其包括如下步骤：

1）构建小容量样本血浆中苯并[a]芘浓度计算数学模型：

（公式1）

式中：c—血浆中苯并[a]芘的浓度，μg／L；

A—样品中苯并[a]芘定量离子和内标定量离子峰面积比值；

a—回归方程的截距；

b—回归方程的斜率；

5—浓缩倍数；

2）准备检测仪器、试剂和材料

检测仪器包括：气相色谱/质谱联用仪；色谱柱；超声波清洗器；低速离心机；氮吹仪；

检测试剂及材料包括：苯并[a]芘和苝-d12储备液；色谱纯正己烷；

3）设定仪器条件和检测模式：

设定色谱条件为：色谱柱为HP-5 MS、30 m×0.25 mm×0.25μm；载气为氦气1.5mL/min；恒流不分流进样口，无填充玻璃棉衬管；进样体积1.0µl；进样口温度200℃；柱箱程序升温；

设定质谱条件：接口温度300℃；EI离子源温度240℃；四级杆温度180℃；离子化电压：70eV；溶剂延迟3min；质谱参数设为选择离子扫描收集数据，即采集模式为SIM；

确定内标物：以苝-d12作为内标物，以分析物和内标物的定量离子丰度比值为纵坐标进行校准曲线绘制和样品测定；

4）制备校准溶液和绘制标准曲线：溶液总体积为1.0mL，按照设定的系列配比制备各序号的校准溶液；取上述各序号的校准溶液各1µl进色谱，在设定的仪器条件和离子碎片参数下进行采集数据，每个浓度平行进样6次，以组分浓度μg/L为横坐标，组分定量离子与对应的内标定量离子比值的均值为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程；

5）待检测样品采集及前处理：

样品采集：用装有抗凝剂的采血管，单次单体采集容量不小于1mL的新鲜血液后充分摇匀，立即在离心机上分离出血浆；

前处理：取分离出的血浆，加入部分正己烷，充分振摇后，冰浴下超声提取，离心机上离心，分离上清液至新试管中，再向血浆中加入部分正己烷，重复上述操作，将上清液取出，与第一次提取液合并，氮吹，取设定量的上清液，加入内标物，使内标物浓度和校准溶液一致；

6）样品检测：

采用步骤2）准备检测仪器、试剂和材料，步骤3）的设定仪器条件和检测模式，按照步骤4）制作校准曲线的仪器条件，对样品进行检测，得到公式（1）中各参数，并将其代入公式（1）中，计算得到测定血浆样品中苯并[a]芘的浓度c；

7）计算样品全血的苯并[a]芘浓度：

将步骤6）苯并[a]芘的浓度c乘以系数1.67，即得到样品全血的苯并[a]芘浓度。

2.根据权利要求1所述的血液中苯并[a]芘的大通量快速检测方法，其特征在于，所述步骤2），还包括如下内容：

色谱柱：固定相为5%苯基甲基聚硅氧烷色谱柱或者多环芳烃专用柱；

苯并[a]芘和苝-d12储备液为：200mg/L或以上浓度，溶剂为气相色谱适用，持证标准溶液。

3.根据权利要求1所述的血液中苯并[a]芘的大通量快速检测方法，其特征在于，所述步骤3），还包括如下内容：

柱箱程序升温具体为：初始温度80℃，保持1min，20℃/min升到160℃，保持1min，10℃/min升到320℃，保持5min，共计27min。

4.根据权利要求1所述的血液中苯并[a]芘的大通量快速检测方法，其特征在于，所述步骤4），还包括如下内容：

具体按照下列配比制备各序号的校准溶液：

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