[发明专利]一种提高SOD3可溶性表达及酶活性的方法在审
申请号: | 202110981858.0 | 申请日: | 2021-08-25 |
公开(公告)号: | CN113667652A | 公开(公告)日: | 2021-11-19 |
发明(设计)人: | 张修文;刘俊玲;孙慧婷;郑亚峰;刘素芬;闵逸飞;史轶超 | 申请(专利权)人: | 常州市第二人民医院 |
主分类号: | C12N9/02 | 分类号: | C12N9/02;C12N1/38;C12R1/19 |
代理公司: | 北京睿智保诚专利代理事务所(普通合伙) 11732 | 代理人: | 周新楣 |
地址: | 213000 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 提高 sod3 可溶性 表达 活性 方法 | ||
1.一种提高SOD3可溶性表达及酶活性的方法,其特征在于,包括如下步骤:在培养基中添加Fe3+,培养SOD3宿主细胞。
2.根据权利要求1所述的一种提高SOD3可溶性表达及酶活性的方法,其特征在于,所述培养基为LB液体培养基。
3.根据权利要求2所述的一种提高SOD3可溶性表达及酶活性的方法,其特征在于,所述培养基中Fe3+的浓度为500~1000μM,所述Fe3+添加时采用FeCl3。
4.根据权利要求3所述的一种提高SOD3可溶性表达及酶活性的方法,其特征在于,所述培养的过程为:将SOD3宿主细胞在23~27℃下培养至OD600为0.38~0.42,加入IPTG诱导剂,继续培养4~6h。
5.根据权利要求4所述的一种提高SOD3可溶性表达及酶活性的方法,其特征在于,所述SOD3宿主细胞为含有原核表达载体的大肠杆菌BL21,所述IPTG诱导剂在培养基中的浓度为0.15~0.25mM。
6.根据权利要求5所述的一种提高SOD3可溶性表达及酶活性的方法,其特征在于,所述原核表达载体为含有SOD3基因的重组质粒。
7.根据权利要求6所述的一种提高SOD3可溶性表达及酶活性的方法,其特征在于,所述质粒为pET-28a(+)质粒。
8.根据权利要求7所述的一种提高SOD3可溶性表达及酶活性的方法,其特征在于,所述SOD3基因提取自拟南芥。
9.根据权利要求1~8任意一项所述的一种提高SOD3可溶性表达及酶活性的方法,其特征在于,所述SOD3基因通过上下游引物扩增得到,所述上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示,所述下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示。
10.Fe3+在增加SOD3可溶性表达及提高酶活性中的应用。
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