[发明专利]用于内源性RNA成像的遗传编码传感器及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于内源性RNA成像的遗传编码传感器，其特征在于，包括RNA传感模块和荧光蛋白报告模块，所述RNA传感模块为具有茎环构象的degApt，所述荧光蛋白报告模块为融合了荧光蛋白的tDeg；所述具有茎环构建的degApt为degAptE1、degAptE2、degAptE3和degAptE4中的一种；所述degAptE1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述degAptE2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述degAptE3的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述degAptE4的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.根据权利要求1所述的用于内源性RNA成像的遗传编码传感器，其特征在于，所述具有茎环构象的degApt使用tRNA_lys支架或环状RNA保护，使用tRNA_lys支架保护的degAptE3的DNA序列如SEQ ID NO.5所示；使用环状RNA保护的degAptE 3的DNA序列如SEQ ID NO.6所示。

3.根据权利要求2所述的用于内源性RNA成像的遗传编码传感器，其特征在于，所述RNA传感模块为环状RNA，所述环状RNA包括两个响应靶标RNA的degAptE 3传感模块，所述环状RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。

4.一种用于内源性RNA成像的遗传编码传感器，其特征在于，包括hMALAT-1传感模块和荧光蛋白报告模块，所述hMALAT-1传感模块的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，所述荧光蛋白报告模块为融合了荧光蛋白的tDeg。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的用于内源性RNA成像的遗传编码传感器，其特征在于，所述荧光蛋白为EGFP、mCherry、Cerulean、Ypet、tdTomato、mRuby2、mKO、mKO2、iRFP670、miRFP703、mIFP和PAiRFP中的一种或多种；

融合了EGFP荧光蛋白的EGFP-tDeg，氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示；

融合了mCherry荧光蛋白的mCherry-tDeg，氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示；

融合了miRFP703荧光蛋白的miRFP703-tDeg，氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示。

6.根据权利要求1至4中任一项所述用于内源性RNA成像的遗传编码传感器，其特征在于，所述荧光蛋白报告模块包括GFP 1-10、GFP-tDeg和n个GFP 11和，所述n个GFP 11与GFP-tDeg蛋白连接；

所述n为0时，GFP-tDeg的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示；

所述n为3时，GFP11×3-GFP-tDeg的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示；

所述n为7时，GFP11×7-GFP-tDeg的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示；

所述n为11时，GFP11×11-GFP-tDeg的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示。

7.一种权利要求1至6中任一项所述用于内源性RNA成像的遗传编码传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将具有茎环构象的degApt cDNAs克隆至质粒中获得用于表达degApt的质粒；

S2、将miniCMV启动子、EGFP和tDeg的cDNAs克隆至表达载体中产生EGFP-tDeg质粒；

或，S1、将hMALAT-1cDNAs克隆至质粒中获得用于表达degApt的质粒；

S2、将miniCMV启动子、EGFP和tDeg的cDNAs克隆至表达载体中产生EGFP-tDeg质粒。

8.一种权利要求1至6中任一项所述用于内源性RNA成像的遗传编码传感器在制备用于活细胞中成像的检测试剂盒中的应用。

9.一种权利要求1至6中任一项所述用于内源性RNA成像的遗传编码传感器在制备用于活细胞中内源RNA的单分子成像的检测试剂盒中的应用。