[发明专利]一种基于生物酶法合成熊去氧胆酸的纯化方法

权利要求书

1.一种基于生物酶法合成熊去氧胆酸的纯化方法，其特征在于，由以下步骤组成：

(1)熊去氧胆酸粗提取：

取生物酶反应后的熊去氧胆酸与蛋白酶的混合物投入反应瓶中，加入甲醇，搅拌升温至50～60℃，维持温度1～2h，加入氯化钙和硅藻土混合物，50～60℃下搅拌1～2h，过滤，用热的甲醇洗滤饼，将滤液浓缩，然后滴加1倍体积的水，在50～60℃维持1～2h，然后降温至5～10℃，过滤，将湿品烘干，得到熊去氧胆酸粗品；

(2)熊去氧胆酸三乙胺盐的制备：

将熊去氧胆酸粗品加入到丙酮中，搅拌升温至40～50℃，维持温度1～2h，然后缓慢加入等物质的量的三乙胺，升温至55℃～60℃回流反应1～2h，然后缓慢将至5～10℃，搅拌2h，过滤，冷丙酮洗涤滤饼，得到湿品熊去氧胆酸三乙胺盐；

(3)熊去氧胆酸三乙胺盐的水解：

将步骤(2)的得到的熊去氧胆酸三乙胺盐湿品投入反应瓶中，加入丙酮和水，搅拌升温至40～50℃，维持温度30min至完全溶解后，滴加盐酸，调节pH至4～5；维持温度1～2h，将反应瓶内溶剂体积浓缩至原体积的50％～70％，然后将温度缓慢降至5～10℃，搅拌1h，过滤，用冷水洗滤饼，干燥即得高纯度的熊去氧胆酸。

2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：在步骤(1)中，硅藻土和氯化钙的比例为9:1，总加入的质量为熊去氧胆酸理论产量的50％～80％。

3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：在步骤(2)中丙酮的量为熊去氧胆酸粗品的8倍体积。

4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于：在步骤(3)中，丙酮为湿品熊去氧胆酸三乙胺盐的5倍体积，水为湿品熊去氧胆酸三乙胺盐的2倍体积。