[发明专利]一种高稳定性骨及骨肿瘤组织微阵列芯片及其制备方法

说明书

本发明涉及一种高稳定性骨及骨肿瘤组织微阵列芯片及其制备方法，采用本发明的方法制备的骨及骨肿瘤组织微阵列芯片，较好的解决了芯片掉点和有效靶组织少及细胞变性等问题，本发明从物理学和平面排列及实用性角度综合设计出最佳骨肿瘤组织芯片排列方式，节约了时间及成本，提高了组织芯片核心质量，在抗体研发、肿瘤研究和基因检测等领域得到了广大科研，临床及教学机构的好评，基本满足组织、蛋白、基因分子等领域肿瘤生物治疗上对于靶向药物的研发和肿瘤诊断及发生机制、转归所需要的对照组样本需求，从而更快捷、便利、全面、严谨的提升科研水平。

技术领域

本发明属于组织芯片技术领域，具体涉及一种高稳定性骨及骨肿瘤组织微阵列芯片及其制备方法。

背景技术

组织芯片也称组织微阵列，是生物芯片技术的一个重要分支，是将许多不同个体组织标本以规则阵列方式排布于同一载体（使用载玻片最多）上，主要用于研究同一种基因或蛋白质分子在不同细胞或组织中表达的情况。该技术自1998年问世以来，以其大规模、高通量、标准化等优点得到大范围的推广应用。其最大优势在于，芯片上的组织样本实验条件完全一致，有极好的质量控制。节省时间、节省试剂更是显而易见的。

我国组织芯片制备技术日趋成熟，但是对于一些特殊组织，比如骨组织和骨肿瘤组织，由于其硬度大，脱钙处理后酸度强，导致组织粘附性差，因此给制作高质量组织芯片造成较大难度，制作起来费时、费力，而且经常出现掉点、脱片现象，组织芯片质量差直接影响到后续实验结果。另外，骨肿瘤组织芯片由于含量多，受组织脱钙影响等原因，有效靶组织细胞少，经常会因为固定、脱钙等前期组织处理不稳定因素而使细胞变性，导致组织芯片组织点内有效靶组织数量和质量得不到保障。

鉴于以上原因，特突出本发明。

发明内容

为了解决现有技术存在的以上问题，本发明提供了一种高稳定性骨及骨肿瘤组织微阵列芯片及其制备方法，本发明所述的芯片解决了芯片掉点和有效靶组织少及细胞变性等问题，节约了时间及成本，提高了组织芯片核心质量。

本发明的第一目的，提供了一种高稳定性骨及骨肿瘤组织微阵列芯片的制备方法，包括如下步骤：

（1）收集骨及骨肿瘤组织样本，对所述的组织样本进行处理；

（2）将处理后的组织样本石蜡包埋，再进行切片HE染色，将HE染色片进行扫描；

（3）由病理医生结合扫描图在显微镜下诊断，标记有效靶组织，按照设计的组织微阵列及点径大小制作组织芯片受体蜡块，对照HE切片标记的有效靶组织区域，在供体蜡块上打孔取样，取出样本柱芯埋放入受体蜡块孔内，全部填埋完毕后，将组织微阵列蜡块放置在57℃恒温箱1.5h固蜡融合，然后室温放置4h，转入2-6℃下冷藏保存6小时以上，进行切片、烤片和HE常规染色，制成的所述的高稳定性骨及骨肿瘤组织微阵列芯片。

本发明的蜡块选用莱卡蜡，熔点52℃-56℃。

进一步的，步骤（1）中所述的组织样本进行处理具体为：将骨及骨肿瘤样本固定于体积分数为10%福尔马林溶液中24小时后再锯取厚度为0.5cm骨片或带骨肿瘤组织，然后在体积分数为10%的福尔马林溶液中固定48小时，将骨或带骨肿瘤组织置于脱钙剂中直至骨组织容易被针刺透，进行脱水、透明、浸蜡、切片。

本发明中的脱钙剂为含盐酸脱钙液，浓盐酸15ml、氯化钠7.5ml、蒸馏水加至100ml得到所述的脱钙剂。每日需要更换新的脱钙剂直至骨组织容易被针刺透，流水冲洗24小时去酸，然后进行下一步处理。

进一步的，步骤（3）中将组织微阵列蜡块放置在57℃下1.5h固蜡融合，然后室温放置4h，转入4℃下冷藏保存6小时以上。

本发明人经过大量试验发现，采用本发明的温度和时间进行固蜡以及室温放置，特定温度冷藏，可以使得组织柱芯充分和受体蜡块相容，避免点片脱落。

本发明中浸蜡过程具体如下：