[发明专利]一种运用流式细胞仪快速测定微囊藻伪空胞体积的方法

说明书

本发明公开了一种运用流式细胞仪快速测定微囊藻伪空胞体积的方法，属于微囊藻上浮能力定量化表征的技术领域，包括藻样收集，微囊藻群体分散为单细胞，分散为单细胞的微囊藻被均分为两份，一份经高压完全破裂伪空胞，之后与另一份未被高压处理的藻细胞以不同比例混合，获得混合藻样，采用Walsby毛细压力管法测定混合藻样伪空胞体积，并进行校正，采用流式细胞仪测定混合藻样中藻细胞的侧向散射光强(简称“散射角”)，建立校正后的伪空胞体积与细胞散射角之间的数量关系，得到标准曲线，运用该标准曲线能够实现微囊藻细胞伪空胞体积的快速测定，本发明具有快速、精确、适用范围广、操作简单的优点。

技术领域

本发明属于微囊藻浮力定量化表征技术领域，涉及一种运用流式细胞仪快速测定微囊藻伪空胞体积的方法。

背景技术

微囊藻群体上浮聚集是微囊藻水华形成的关键阶段，也是水华监测预警需掌握的关键信息。微囊藻群体之所以能够上浮至水体表层，是因为微囊藻细胞合成了一种能够提供上浮能力的伪空胞，伪空胞可调节微囊藻群体的上浮和下沉。因此，高效和精确定量测定微囊藻伪空胞体积是监测预警微囊藻水华需解决的关键问题。

目前，微囊藻伪空胞体积的测定方法是由英国科学家A.E.Walsby在1982发明的毛细压力管法。该法虽然能够较准确测定微囊藻伪空胞的体积，但由于操作繁琐、测量过程需要保持恒温等，导致难以实现高效、快速分析微囊藻伪空胞。此外，Walsby毛细压力管法测定微囊藻伪空胞时每次测定需较多藻悬液样品，测定的伪空胞体积需根据藻细胞浓度再换算至单个藻细胞伪空胞的体积，因此Walsby毛细压力管法不能在细胞水平上直接分析微囊藻伪空胞的体积。

基于以上分析，提供一种可以直接从细胞水平上快速、精确测定微囊藻伪空胞体积的方法对微囊藻水华监测预警精度的提高具有重要现实意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对上述现有技术的不足，而提供一种运用流式细胞仪快速测定微囊藻伪空胞体积的方法，提供如下技术方案：一种运用流式细胞仪快速测定微囊藻伪空胞体积的方法，包括以下步骤，

步骤一:收集微囊藻，将微囊藻群体分散为单细胞微囊藻样后，用甲醛溶液固定；

步骤二：将单细胞微囊藻样平均分为两份，一份进行高压完全破裂伪空胞，另一份保留伪空胞；

步骤三：将两份藻样按照不同比例混合，制作不同比例的混合藻样；

步骤四：采用Walsby毛细压力管法测定混合藻样的伪空胞体积，并进行校正；采用流式细胞仪测定混合藻样的侧向角散射光强；

步骤五：混合藻样测定完成后，建立伪空胞体积与细胞侧向角散射光强的标准曲线；

步骤六：通过流式细胞仪测定待测微囊藻的侧向角散射光强，根据步骤五所得标准曲线计算待测微囊藻的伪空胞体积。

优选的，所述步骤一采用浮游生物富集网在湖水中收集微囊藻。

优选的，所述步骤一具体为将微囊藻群体置于去离子水中，放置1-360min，摇匀分散为单细胞微囊藻样。

优选的，所述步骤一具体为将微囊藻群体置于去离子水中，放置10-180min，摇匀分散为单细胞微囊藻样。

优选的，所述步骤一中甲醛溶液的终浓度为0.1-5％，固定时间为10-60min。

优选的，所述步骤二中高压破裂伪空胞的压力强度为0.5-2.5MPa。。

优选的，所述步骤三中混合藻样为6个，其中，进行高压破裂伪空胞的单细胞微囊藻样浓度占比为100％、80％、60％、40％、20％和0％。