[发明专利]干细胞应用在治疗神经系统疾病的移植方法

说明书

本发明公开了干细胞应用在治疗神经系统疾病的移植方法，涉及干细胞医疗研究技术领域，该干细胞应用在治疗神经系统疾病的移植方法，包括通过动物细胞离体培养实验，采用同种颅内移植实验定向移植NSCs到同品系小鼠不同侧大脑半球，对小鼠脑损伤修复治疗。从NSCs移植对小鼠脑损伤影响来看，通过比较评分高的左侧颅内移植实验小鼠与评分高的右侧颅内移植实验小鼠的移植损伤情况可以看出，左右侧脑组织结构均较为完整，细胞排列规则，少见瘢痕组织形成，大量移植物沿注射针道分布，本发明采用干细胞移植治疗神经系统，选择胚胎端脑NSCs输入途径，细胞移植到同品系小鼠不同侧大脑半球，在神经功能检测评定较好的情况下，能保证干细胞发挥最大效能。

技术领域

本发明涉及干细胞医疗研究技术领域，具体为干细胞应用在治疗神经系统疾病的移植方法。

背景技术

采用干细胞移植治疗复杂神经系统疾病，是当前的发展趋势和治疗方向。

干细胞具有向神经细胞定向分化的潜能，在理论上，干细胞被移植入神经系统微环境后，就有可能定向分化为神经元和神经胶质细胞，从而发挥其细胞替代与神经修复功能。

但是，神经系统具有高度复杂性，外源干细胞多难以整合入宿主神经系统内。它们一般会在一段时间内独立存活于其中，并通过旁分泌神经营养因子及免疫调节等方式激活内源神经干细胞分化，进而修复与治疗神经系统疑难疾病。即使有少数移植后分化的干细胞整合在宿主神经系统内，但其是否发挥了神经替代功能，尚需要进一步验证。

采用干细胞移植治疗神经系统疑难疾病，选择恰当的干细胞输入途径尤为关键，因为这能保证干细胞发挥最大效能。

发明内容

(一)解决的技术问题

本发明提供了干细胞应用在治疗神经系统疾病的移植方法，通过动物细胞离体培养实验，采用同种颅内移植实验定向移植NSCs到同品系小鼠不同侧大脑半球，应用于对小鼠脑损伤修复治疗。

(二)技术方案

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：干细胞应用在治疗神经系统疾病的移植方法，通过动物细胞离体培养实验，采用同种颅内移植实验定向移植NSCs到同品系小鼠不同侧大脑半球，对小鼠脑损伤修复治疗。

优选的，所述动物细胞离体培养实验，包括以下步骤：

S1-1：取4只孕C57BL/6小鼠胚胎端脑；

S1-2：分别无菌分离纯化NSCs并放入培养基中；

S1-3：分别取剪碎端脑用0.25％胰蛋白酶和0.02％EDTA处理消化后过滤，弃上清液加入NSCs培养基中重悬细胞；

S1-4：分别接种到培养瓶中并放置到培养温度37℃，气体体积分数为5％二氧化碳/95％空气、饱和湿度条件下的培养箱中培养，每天观察细胞形态；

S1-5：培养完成后，分别将悬浮细胞转移至对应离心管中1000r/min离心处理10min，弃上清液，加0.25％胰蛋白酶和0.02％EDTA消化后1000r/min离心处理10min，再弃上清液，分别加入对应NSCs培养基中，进行传代培养；

S1-6：用BrdU对NSCs标记处理，将上述细胞用0.25％胰蛋白酶和0.02％EDTA消化后，放置于离心管中洗涤3次。

优选的，所述颅内移植实验，包括以下步骤：

S2-1：将S1-1中二只小鼠麻醉并固定，清洁皮毛，依次剪除一只小鼠鼠毛暴露头部皮肤，碘伏消毒，切开皮肤，在小鼠右侧颅骨用灭菌的磨钻钻孔，再用灭菌进样器注射细胞悬液5μL，细胞总量5×10⁵，注射结束留针5min后拔针逐层消毒缝合头皮；