[发明专利]一种使用Excel精确检测SOD酶活的方法

说明书

本发明公开一种使用Excel精确检测SOD酶活的方法，将加入SOD酶液之后每间隔1min的数据记录入Excel，分别为5组数据，5点的数值在Excel上模拟出对应曲线并计算偏差，当曲线线性拟合度在99%以上时，判断此时的邻苯三酚自氧化速率拟制曲线为直线，计算直线的斜率K'，当K'/K=50%时，将△'A325的吸光值代入公式1，得出SOD酶活，本发明在传统化学法的基础上，对测量数据用Excel进行精准分析，判断检测点，从而得出精确酶活，精确检测SOD酶活。

技术领域

本发明属于SOD酶活的检测技术领域，具体涉及到一种使用Excel精确检测SOD酶活的方法。

背景技术

SOD是生物体系中抗氧化酶系的重要组成成员，广泛分布在微生物、植物和动物体内，传统SOD酶活的测定方法很多，常见的有化学法、免疫法和等电点聚焦法。其中化学法应用最普遍，化学法的原理主要是利用有些化合物在自氧化过程中会产生有色中间物和O₂-，利用SOD分解而间接推算SOD酶活。在化学方法中，最常用的有黄嘌呤氧化酶法，邻苯三酚法，化学发光法，肾上腺素法，NBT-还原法，光化学扩增法，Cyte还原法等。但在化学法测量SOD酶活时存在无法对测量数据进行精准计算的问题，为满足SOD酶活的检测需求，本发明提供一种使用Excel精确检测SOD酶活的方法。

发明内容

针对上述问题，本发明的主要目的在于设计一种使用Excel精确检测SOD酶活的方法,在传统化学法的基础上，对测量数据用Excel进行精准分析，判断检测点，从而得出精确酶活，解决在生物发酵中如何精确检测SOD酶活。

为了实现上述目的本发明采用如下技术方案：

一种使用Excel精确检测SOD酶活的方法，包括如下步骤：

步骤一：配制A液：pH值8.2；

0.1mL三羟甲基氨基甲烷(Tris)-盐酸缓冲溶液（内含1mmol/L EDTA·2Na）；

称取1.2114 g Tris和37.2mgEDTA·2Na溶于62.4mL0.1moL盐酸溶液中,用蒸馏水定容至100mL；

步骤二：配制B液：4.5mmoL邻苯三酚盐酸溶液；

称取邻苯三酚(A.R)56.7mg溶于少量10mmol/L盐酸溶液,并定容至100mL；

步骤三：邻苯三酚自氧化速率测定在25℃时,于10mL比色管中依次加入A液2.35mL、蒸馏水2.00mL、B液0.15mL，加入B液立即混合并倾入比色皿中,分别测定在325nm波长条件下初始时和1min后吸光值,二者之差即邻苯三酚自氧化速率△A325(min-1)；

步骤四：SOD酶液抑制邻苯三酚自氧化速率测定，按步骤三加入一定量酶液使抑制邻苯三酚自氧化速率为△A325(min-1)的50%，此时的酶活定义为SOD酶活，计算公式为：

（公式1）

△A325-邻苯三酚自氧化数率；

△’A325-SOD样品抑制邻苯三酚的自氧化速率；

V-所加SOD样品的体积，单位mL；

D-SOD酶液的稀释倍数；

4.5-反应液总体积，单位mL；

步骤五：将加入SOD酶液之后每间隔1min的数据记录入Excel，分别为5组数据，即△'1, △'2, △'3, △'4,△'5。

作为本发明进一步的描述，将步骤五中的5点的数值在Excel上作散点图，然后用散点图模拟出对应趋势线，在趋势线图中会显示出曲线公式和偏差R²（即曲线拟合度），当曲线线性拟合度在99%以上时，判断此时的邻苯三酚自氧化速率拟制曲线为直线。

作为本发明进一步的描述，计算直线的斜率K'，当K'/K=50%时，将△'A325的吸光值代入公式1，得出SOD酶活。

相对于现有技术，本发明的技术效果为：