[发明专利]生物检材中13种贝类毒素的检验方法

说明书

本发明公开生物检材中13种贝类毒素的检验方法，包括如下步骤：生物检材经萃取处理后得到样品提取液；以水为溶剂，用C1、C2、GTX1、GTX2、GTX3、GTX4、GTX5、STX、NEO、dcSTX、dcNEO、dcGTX2和dcGTX3共13种贝类毒素的标准物质分别配制标准物质溶液；用13种贝类毒素的标准物质溶液分别配制标准溶液；分别用13种贝类毒素的标准物质溶液配制混合标准工作溶液；质控样品的制备；分别吸取样品提取液、空白样品提取液、添加样品提取液、标准溶液和混合标准工作溶液，采用液相色谱‑质谱仪进行检测，分析并计算检测结果。本发明具有测定方法简单、易于操作、重复性好、灵敏度高等优点，适用于法庭科学领域，实现对生物检材中多种贝类毒素的高灵敏度同时测定。

技术领域

本发明涉及贝类毒素检测技术领域。具体地说是生物检材中13种贝类毒素的检验方法。

背景技术

由毒藻产生的毒素往往经贝类传播媒介造成人类中毒，因而这类毒素通常被称为贝毒。贝类毒素主要分为5类：腹泻性贝毒DSP、麻痹性贝毒PSP、神经性贝毒NSP、记忆缺损性贝毒ASP、西加鱼类毒素CTX等。其中，麻痹性贝毒主要表现包括：轻微的中毒，其症状主要表现为唇、口、舌感觉异常和麻木，而后波及脸及脖子等部位，指尖常有针刺般痛感并伴有轻微的头痛和头晕。稍微严重的中毒，出现胳膊和腿的麻痹、随意运动障碍、说话语无伦次。严重的中毒，可出现呼吸麻痹，甚至因窒息而亡。

贝类毒素的中毒机理为：麻痹性贝毒可选择性作用于肌肉和神经细胞Na⁺通道，阻碍Na⁺内流，导致动作电位无法形成，从而产生麻痹状态。Na⁺通道大多分布于哺乳动物的神经、骨骼肌纤维和大多数心脏的肌肉纤维兴奋细胞的细胞膜上。在安静状态下，细胞处于膜内K⁺浓度高、膜外Na⁺浓度高的状态，当细胞受到刺激后Na⁺快速内流产生动作电位，进而在神经细胞上开始传播。当麻痹性贝毒分子进入体内后，阻断电压门控Na⁺通道，从而减缓或终止动作电位的传导。

在刑侦领域及司法实践中，生物检材中各类毒素的定性和定量分析检测结果，是刑侦及司法工作中的重要依据和证据。贝类毒素在进入生物体后经过代谢后残余量通常较低，因而在取得的血液、尿液及其它生物组织中的含量也会较低，在加上可能受到基质的影响。因此，生物检测中贝类毒素的检测对实际操作和方法具有更高的要求。目前，关于贝类毒素的检测大多针对贝类本身或相关的食品原料，而对于生物检材中贝类毒素的检测鲜有报道。而对食品原料中贝类毒素的检测，其检出限往往较高(通常≥2ng/mL)，对生物检材中贝类毒素的检测来说，灵敏度不够；因而不能将现有的用于食品原料中贝类毒素的检测方法直接应用于生物检材中。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种生物检材中13种贝类毒素的检验方法，可以快速、高效且灵敏的检测出生物检材中13种贝类毒素，以改善法庭科学领域，生物检材中贝类毒素检测方法上的不足。

为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

生物检材中13种贝类毒素的检验方法，包括如下步骤：

步骤A、生物检材的处理：生物检材经萃取处理后得到样品提取液；

步骤B、标准物质溶液的准备：以水为溶剂，用13种贝类毒素的标准物质分别配制13种贝类毒素的标准物质溶液；

步骤C、标准溶液的准备：用13种贝类毒素的标准物质溶液分别配制13种贝类毒素的标准溶液；

步骤D、混合标准工作溶液的准备：分别用13种贝类毒素的标准物质溶液配制混合标准工作溶液；

步骤E、质控样品的制备；

步骤F、分别吸取样品提取液、空白样品提取液、添加样品提取液、标准溶液和混合标准工作溶液，采用液相色谱-质谱仪进行检测，分析并计算检测结果；