[发明专利]体外合成不同紧密程度的糖原状α-葡聚糖的方法

权利要求书

1.一种体外合成不同紧密程度的糖原状α-葡聚糖的方法，其特征在于，反应体系以磷酸盐溶液为缓冲液，蔗糖为底物，以麦芽三糖为引物，并添加蔗糖磷酸化酶、α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶；所述蔗糖和麦芽三糖的摩尔比例为(400～8000):1，α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶的添加量比例为1:(50～400)；α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶的添加量比例与糖原状α-葡聚糖的疏松程度成正相关。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲液中磷酸盐浓度在160mM～240mM；所述蔗糖在反应体系中的浓度为200～300mM；所述麦芽三糖在反应体系中的浓度为0.03～0.6mM。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述蔗糖磷酸化酶的添加量为1～3U/mL。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述α-葡聚糖磷酸化酶的添加量为5～40U/μmol麦芽三糖；所述分支酶的添加量为1800～2200U/μmol麦芽三糖。

5.根据权利要求2～4任一所述的方法，其特征在于，反应体系中含有磷酸盐缓冲液以维持pH＝6.5～7.5，将蔗糖和麦芽三糖添加至反应体系中，在50～55℃下保温15～20min加入α-葡聚糖磷酸化酶，反应150～180rpm震荡反应20～30min后加入蔗糖磷酸化酶和分支酶，在50～55℃下震荡反应4～16h。

6.一种提升糖原状α-葡聚糖疏松程度的方法，其特征在于，在以蔗糖为底物、麦芽三糖为引物的磷酸盐反应体系中添加蔗糖磷酸化酶、α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶；所述蔗糖和麦芽三糖的摩尔比例为600:1；所述α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶的加酶量比例为1:(50～400)；反应14～20h；糖原状α-葡聚糖的疏松程度与α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶的添加量比例成正相关。

7.一种提升糖原状α-葡聚糖的半径的方法，其特征在于，在以蔗糖为底物、麦芽三糖为引物的磷酸盐反应体系中添加蔗糖磷酸化酶、α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶；所述蔗糖和麦芽三糖的摩尔比例为600:1；α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶的加酶量比例为1:(50～400)；反应14～20h。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述缓冲液中磷酸盐浓度在160mM～240mM；所述蔗糖在反应体系中的浓度为200～300mM；所述麦芽三糖在反应体系中的浓度为0.03～0.6mM；所述蔗糖磷酸化酶的添加量为1～3U/mL。

9.一种同时调节糖原状α-葡聚糖分子链疏松度和分子量大小的方法，其特征在于，在以蔗糖为底物、麦芽三糖为引物的磷酸盐反应体系中添加蔗糖磷酸化酶、α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶；α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶的加酶量比例为1:(50～400)；α-葡聚糖磷酸化酶和分支酶的加酶量比例为1:50，蔗糖浓度为240mM；麦芽三糖浓度与分子链疏松度成正相关，麦芽三糖的浓度与糖原状α-葡聚糖分子量的对数成负相关：

Y＝-1.0428x+7.5152，其中y为以10为底的糖原状α-葡聚糖的分子量的对数，x为麦芽三糖的浓度。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，调节麦芽三糖的浓度为0.03mM～0.6mM。